تثبیت آنزیم اوره آز روی نانو بیوفیبریل های آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی

آنزیم اوره آز (EC.3.5.1.5) از دسته هیدرولاز ها است که هیدرولیز اوره را به آمونیاک و دی اکسیدکربن کاتالیز می کند. این آنزیم کاربردهای مختلفی در متابولیسم نیتروژن، تهیه واکسن، کیت های تشخیص اوره، صنایع نوشابه سازی و غیره دارد. در این تحقیق از نانورشته های آمیلوئیدی حاصل از آلبومین سرم گاوی به عنوان بستری جدید برای تثبیت آنزیم اوره آز استفاده شد. تولید نانو رشته های آمیلوئیدی با سه تکنیک طیف سنجی کنگورد، اسپکتروفلوریمتری و اسپکتروپلاریمتری بهینه سازی شده و رشته های حاصله با تصاویر میکروسکوپ الکترونی مورد تایید قرار گرفتند. سپس آنزیم اوره آز با استفاده از مولکول های گلوتارآلدهید و با ایجاد پل های عرضی روی رشته های آمیلوئیدی تثبیت شده و فاکتورهای سینتیکی آن با آنزیم آزاد مقایسه شدند. بیشترین میزان تولید رشته های آمیلوئیدی پس از 48 ساعت انکوباسیون آلبومین سرم گاوی با غلظت 10 میلی گرم بر میلی لیتر و دمای 70 درجه سانتی گراد در بافر سیترات-فسفات با pH برابر 4 به دست آمد. آنزیم تثبیت شده نسبت به شکل آزاد دارای قابلیت نگه داری و پایداری بیشتری بود و فعالیت ویژه بالاتر و نیز Km کوچکتری را نشان داد. دمای بهینه از 40 به 70 درجه سانتی گراد و pH بهینه نیز از 6 تا 7 به 6 تا 9 در آنزیم تثبیت شده بهبود یافت. بنابراین رشته های آمیلوئیدی با داشتن گروه های شیمیایی مختلف، برای تثبیت آنزیم اوره آز مناسب بوده اند. بهبود ویژگی های سینتیکی و پایداری آنزیم اوره آز در اثر تثبیت بر رشته های آمیلوئیدی امکان استفاده گسترده تر از این آنزیم را در صنایع مرتبط فراهم می آورد.