شناسایی پروتئین های راپتری4(ROP4)و انولاز2 توکسوپلاسما گوندی به عنوان آنتی ژن های غالب ایمنی در گوسفند

توکسوپلاسما گوندی (Toxoplasma gondii)، تک یاخته مهم و پاتوژن اجباری درون سلولی است که در میزبانان واسط (مهره داران خونگرم) ایجاد عفونت توکسوپلاسموزیس حاد و مزمن می نماید. توکسوپلاسموز مادرزادی در انسان و گوسفند در دوران بارداری منجر به سقط جنین می شود. به منظور تهیه داروهای شیمیایی و تولید واکسن موثر علیه عفونت توکسوپلاسموز و همچنین تهیه مارکرهای تشخیصی قوی و مناسب برای استفاده در تکنیک های سرولوژیکی، مولکولی، شناسایی پروتئین های تاکی زوئیت های توکسوپلاسما گوندی اهمیت زیادی دارد. هدف از انجام این تحقیق، شناسایی و معرفی پروتئین های آنتی ژنیک و ایمونوژنیک غالب ایمنی توکسوپلاسما گوندیی در گوسفند با استفاده از تکنیک ایمونوپروتئومیکس بود. برای تهیه تاکی زوئیت ها، تعداد 30 سر موش سوری (C57BL/6) ماده بالغ 7-5 هفته به انگل توکسوپلاسما گوندی آلوده شدند. پروتئین های تاکی زوئیت ها با روش سونیکاسیون استخراج گردید. غلظت پروتئین ها به روش بردفورد تعیین شد. از 10 راس گوسفند آلوده به توکسوپلاسما گوندی، سرم حاوی آنتی بادی ضد توکسوپلاسما تهیه گردید. مراحل الکتروفورز دوبعدی 2-DE-SDS-PAGE، وسترن بلاتینگ و ایمنوبلاتینگ اجرا شد. با انطباق دادن تصاویر ژل های 2-DE و ایمنوبلاتینگ، اسپات های مربوط به پروتئین های آنتی ژنیک و ایمنوژنیک غالب ایمنی شناسایی و مورد برش و با روش های مس اسپکترومتری MS/MS و MALDI-TOF/MS مورد آنالیز قرار گرفت و پروتئین های انولاز 2 و پروتئین راپتری 4 (ROP4) شناسایی شد. این دو پروتئین می توانند به عنوان مارکر های تشخیصی در تکنیک های سرولوژیکی مانند الایزا و نیز در تولید واکسن علیه عفونت توکسوپلاسموز مورد استفاده قرار بگیرند.