تحلیل میدانی تشخیص سریع بیماری بورس عفونی با روش تقویت ایزوترمال متصل به حلقه

بیماری بورس عفونی (IBD) یک بیماری حاد، سرکوب گر ایمنی و به شدت واگیردار است که طیور در حال رشد آلوده شده با ویروس بیماری بورس عفونی (IBDV) را درگیر می کند. این بیماری در پاکستان شایع است و هر ساله سبب ضررهای اقتصادی فراوانی می شود. هدف این مطالعه پیشنهاد حساس ترین و اختصاصی ترین راه، و روشی سریع برای شناسایی IBDV و مقایسه آن با نسخه برداری معکوس واکنش زنجیره ای پلیمراز (RT-PCR) رایج موجود برای تشخیص این ویروس است. به منظور شناسایی IBVD از پرایمرهای مختلفی برای RT-PCR و نسخه برداری معکوس-تقویت ایزوترمال متصل به حلقه (RT-LAMP) استفاده شد. پرایمرهای RT-LAMP به طرز شگفت آوری بسیار اختصاصی بوده و هیچگونه واکنش متقاطعی با سایر پاتوژن های حیوانی نداشتند. علاوه بر این مشخص شد که RT-LAMP نسبت به RT-PCR در شناسایی IBDV 10 برابر حساس تر است. RT-LAMP در مقایسه با RT-PCR 2/9%، نمونه های فارمی بیشتری را شناسایی کرد. توالی محصول های PCR، شناسایی شد و آنالیز فیلوژنیک سویه های مطالعه شده نشان داد که آن ها بیشترین شباهت را با سویه های بومی و هندی IBDV دارند. همچنین مشخص شد که RT-LAMP روشی ساده، اختصاصی، کم زحمت تر و تکنیکی بهتر در مقایسه با RT-PCR برای شناسایی سریع IBDV است. به طور کلی RT-LAMP بر اساس مشاهده کدورت و یا افزودن ترکیبی فلورسنت مثل SYBR Green I و مشاهده رنگ حاصل از آن مثبت اعلام می شود. به علاوه، وجود این قابلیت که می توان به طور مستقیم از هموژنات نمونه های فارمی استفاده کرد و قله های حاصله را در نمودار های نشان داده شده در مانیتور یا لپ تاپ به طور مستقیم مشاهده نمود، سبب شده که این روش در مقایسه با RT-PCR مبتنی بر ژل، بسیار اقتصادی تر و برای انجام آن به زمان کمتری نیاز باشد.