همسانه سازی ژن و بیان دمین عملکردی ترومبوپویتین به صورت محلول با به کارگیری میزبان بیانی رزتاگامی

پیام:
نوع مقاله:
مقاله پژوهشی/اصیل (دارای رتبه معتبر)
چکیده:
پروتئین ترومبوپویتین یک سایتوکین مهم است که در تنظیم تکثیر سلول های بنیادی خون ساز و تمایز مگارکاریوسیت ها دخیل است. به دلیل مقدار اندک این پروتئین در خون، در بسیاری از مراکز بیوتکنولوژی این پروتئین به صورت نوترکیب تولید می شود. هدف از این مطالعه همسانه سازی و بیان ژن این پروتئین بود.
این مطالعه تجربی آزمایشگاهی در مرکز تحقیقات انتقال خون تهران، از مرداد 1 3 9 5 تا شهریور 1 3 9 6 انجام گرفته است. سلول های رده سلولی HepG2 کشت و از آن ها RNA جهت الگوی سنتز cDNA استخراج شد. cDNA به عنوان الگوی واکنش PCR با استفاده از پرایمرهای طراحی شده قرار گرفت و توالی رمزکننده ی دمین (Domain) عملکردی ترومبوپویتین جداسازی و وارد پلاسمید pET32 شد. وکتور نوترکیب با استفاده از روش ختم زنجیره توالی یابی و سپس وکتور نوترکیب به سویه ی بیانی رزتاگامی تلقیح شد. القای بیان پروتئین با استفاده از مقادیر مناسب Isopropyl β -D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) انجام گرفت. باکتری بیان کننده تهیه شده، تحت آزمون وسترن بلات قرار گرفت.
با خوانش توالی وکتور نوترکیب، حضور توالی ژن ترومبوپویتین تایید شد. القای بیان، ارزیابی پروتئین کل سلول حاکی از بیان پروتئین هدف به صورت محلول در فضای سیتوپلاسمی بود. جایگاه قرارگیری باندهای مربوط به توالی مورد انتظار در ژل پلی آکریل آمید و واکنش انجام گرفته با آنتی بادی های آنتی هیستگ در وسترن بلات گویای درستی بیان پروتئین هدف بود.
زبان:
فارسی
صفحات:
388 تا 395
لینک کوتاه:
magiran.com/p1879889 
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یک‌ساله به مبلغ 990,000ريال می‌توانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.
دسترسی سراسری کاربران دانشگاه پیام نور!
اعضای هیئت علمی و دانشجویان دانشگاه پیام نور در سراسر کشور، در صورت ثبت نام با ایمیل دانشگاهی، تا پایان فروردین ماه 1403 به مقالات سایت دسترسی خواهند داشت!
In order to view content subscription is required

Personal subscription
Subscribe magiran.com for 50 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!