جداسازی،کلونینگ و بررسی ویژگی های بیوانفورماتیکی ژن دلتا15 دسچوراز از مخمر Pichia pastoris GS115 جهت افزایش تولید اسید چرب آلفالینولنیک اسید در دانه های روغنی

اسیدآلفالینولنیک یکی از اجزای تشکیل دهنده اسیدهای چرب امگا3 می باشد که برای حفظ سلامت بدن انسان ضروری بوده ولی در داخل بدن انسان ساخته نمی شوند. هدف از این پژوهش همسانه سازی ژن دلتا15دسچوراز به منظور افزایش تولید اسیدآلفالینولنیک در گیاهان دانه روغنی می باشد. بدین منظور، پس از استخراج RNA و سنتز cDNA از مخمر پیکیا پاستوریس سویه GS115، این ژن توسط پرایمرهای اختصاصی حاوی توالی کوزاک تکثیر، و جهت توالی یابی در وکتورPTZ57R/T همسانه سازی شد. قطعه نوترکیب پس از تایید توالی از وکتور TA جدا و به pBluescript KS (+) حاوی پروموتر ناپین الحاق شد. سپس سازه ژنی طراحی شده جهت انتقال به گیاه، در ناقل دوگانه pBI121 همسانه سازی و به آگروباکتریوم تومیفاسینس سویه LBA4404، منتقل شد. خصوصیات بیوانفورماتیکی ژن مورد بررسی توسط ابزارهایی مانندTopPred TMHMM, ، ProtParam وSOPMA بررسی گردید. نتایج واکنش PCR و تکثیر قطعه ای به طول bp1246 صحت همسانه سازی این ژن را تایید کرد. همچنین تکثیر قطعه ای به طول bp 1210 توسط پرایمرهای داخلی پروموتر ناپین و ژن دلتا 15دسچوراز، و نیز ایجاد قطعه bp 2145 در هضم آنزیمی، تاییدی بر الحاق صحیح این ژن در امتداد پروموتر ناپین بود. نتایج توالی یابی نوکلئوتیدی نشان داد که توالی کد کننده این آنزیم مشتمل بر 1246 نوکلئوتید و کد کننده 415 اسید آمینه می باشد. آنالیز توالی آمینواسیدی وجود دو دومین و 5 هلیکس تراغشایی را تایید کرد. همچنین پیش بینی خواص پروتئینی، بررسی سیگنال پپتیدها و ساختار دوم، ثابت کرد که این آنزیم جزء آنزیم های پایدار و غشایی می باشد.