جداسازی مایکوباکتریوم ایویوم زیر گونه پاراتوبرکولوزیس از نمونه های مشکوک و تائید آن به روش Nested-PCR

پاراتوبرکلوزیس (بیماری یون) بیماری مزمن گرانولوماتوزی روده باریک توسط مایکوباکتریوم ایویوم تحت گونه پاراتوبرکولوزیس (MAP) ایجاد می شود. در کنترل بیماری، مهم ترین اقدام تشخیص و جداسازی حیوانات آلوده می باشد لذا هدف این بررسی جداسازی عامل این بیماری از دام های مشکوک و در ادامه تائید جدایه ها با استفاده از تست های مولکولی بود. برای این منظور 142 نمونه مشکوک ارسالی از استان های اصفهان، البرز، تهران، خراسان شمالی، خوزستان، زنجان، فارس، قزوین، کرمان و گلستان پس از آلودگی زدایی بر روی محیط کشت هرالد اگ حاوی مایکوباکتین و بدون مایکوباکتین کشت داده شدند. پس از استخراج DNA، -16S rRNA PCR و سپس از نمونه های مثبت Nested-PCR انجام شد. در مجموع از 142 نمونه مشکوک 47 جدایه بدست آمد. در گسترش میکروسکوپی همه جدایه های مثبت در رنگ آمیزی زیل نلسون باسیل اسید فاست مشاهده گردید و در 83 نمونه از مجموع 142 نمونه مورد آزمایش و همچنین از سویه های مایکوباکتریایی در جواب 16s rRNA PCRباندی در ناحیه bp 543 مشاهده شد که نشاندهنده حضور مایکوباکتریوم در نمونه های فوق بود. از تمامی جدایه ها و سویه های کنترل مثبت و منفی Nested-PCR انجام پذیرفت که در مرحله اول باند bp 398 توسط پرایمرهای P90 و P91 و در مرحله بعد قطعه ای به طول bp 298 توسط پرایمرهای AV1 و AV2 حاصل گردید که نشان دهنده وجود مایکوباکتریوم پاراتوبرکولوزیس در نمونه ها بود. بر اساس این مطالعه Nested-PCR به عنوان روش مناسب تشخیص سریع قطعی موارد بیماری پیشنهاد می گردد.