اثر هرسپتین نوترکیب بر رشد سلول های سرطانی پستان

سرطان پستان یکی از شایع ترین انواع سرطان در میان زنان است . مولکول HER-2 به عنوان گیرنده تیروزین کینازی از خانواده گیرنده های رشد عامل اپیدرمی، عامل اصلی سرطان است. مولکول پروتئینی هرسپتین که یک آنتی بادی ضد HER-2 است؛ می تواند نقش مهمی در تشخیص و درمان سرطان پستان داشته باشد. این مطالعه به منظور ساب کلون کردن ژن هرسپتین و سپس بیان در سیستم پروکاریوتی (E.coli) و تولید هرسپتین نوترکیب به منظور استفاده در درمان سرطان پستان انجام شد. در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی ژن هرسپتین از سازه سنتزی با روش هضم آنزیمی جدا و درون وکتور بیانی pET28a انتقال داده شد. زیر همسانه سازی ژن موردنظر با استفاده از PCR و هضم آنزمی تایید گردید. پس از انتقال وکتور نوترکیب به میزبان E.coli BL21 DE3 ، با استفاده از القاگر IPTG ژن نوترکیب هرسپتین بیان شد. پروتئین نوترکیب با استفاده از SDS-PAGE ارزیابی و تخلیص با ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی نیکل انجام شد و در نهایت توسط وسترن بلاتینگ با استفاده از آنتی بادی ضدهیستیدین تایید شد. میزان کشندگی و زنده ماندن سلول ها در مجاورت با هرسپتین نوترکیب با روش MTT بررسی شد. پس از ساب کلونینگ ژن هرسپتین، PCR و هضم آنزیمی، قطعه 741 جفت بازی ژن هرسپتین را تایید کرد. بیان پروتئین نوترکیب هرسپتین و ارزیابی آن بر روی ژل SDS-PAGE اندازه حدود 27 کیلودالتون را تایید کرد. پروتئین نوکیب با استفاده از آنتی هیستیدین نیز تایید شد. پروتئین خالص شده در مجاورت با لاین سلول SKBR3 توانایی متوقف کننده رشد سلول های سرطانی را داشت. با توجه به این که آنتی ژن HER2 به وفور بر سطح سلول های سرطانی پستان بیان می شود؛ پروتئین هرسپتین می تواند به عنوان یک آنتی بادی بازدارنده عمل نموده و رشد سلول های سرطانی پستان را مهار کند.