طراحی و بهینه سازی سیستم الایزای نقطه ای (Dot-blot ELISA) با آنتی ژن های اختصاصی برای تشخیص ساده و سریع مشمشه

مشمشه از قدیمی ترین بیماری های واگیر خطرناک و مشترک بین انسان و حیوان است که با ظهور جراحات گرانولوماتوزی قرحه ای در پوست و غشاهای مخاطی مشخص می شود. با توجه به گزارش حتی یک مورد بیماری و لزوم جلوگیری از انتشار آن با شناسایی و معدوم سازی میزبان های آلوده، شناسایی زودهنگام بیماری با روش های حائز حساسیت و ویژگی قابل قبول، از اهمیت بالایی برخوردار است. مطالعه حاضر به منظور طراحی و بهینه سازی سیستم الایزای نقطه ای (Dot-blot ELISA) با آنتی ژن های اختصاصی جهت تشخیص ساده و سریع مشمشه در نمونه های سرمی اسب سانان انجام گرفت. سویه های بورخولدریا مالئی در محیط مایع نوترینت همراه با گلیسیرول 4 درصد کشت داده شدند. آنتی ژن های کل سلول باکتری با استفاده از روش سونیکاسیون و ترسیب با تری کلرو استیک اسید (TCA) استخراج شد. غلظت بهینه آنتی ژن-آنتی بادی با روش تیتراسیون چکر بورد معین شد. آنتی ژن باکتری روی کاغذ نیتروسلولز مفروش و بعد از متوقف سازی با شیرخشک، سرم حیوان مشکوک و سپس آنتی بادی کونژوگه شده با HRP اضافه گردید و با استفاده از سوبسترای TMB، سیگنال ها رهگیری شد. تعداد 4 نمونه از 90 نمونه سرم با استفاده از آزمون الایزای نقطه ای، مثبت گزارش شد. ویژگی و حساسیت آزمون، به ترتیب 96/62 و 100 درصد برآورد گردید. کشت و جداسازی بورخولدریا مالئی از نمونه های بالینی حیوان، اعتبار تست را تایید کرد. یافته ها نشان داد روش الایزای نقطه ای حائز حساسیت، ویژگی و دقت بالا در تشخیص مشمشه بوده و به دلیل سرعت، سهولت تفسیر بدون نیاز به ابزار خاص، مقرون به صرفه بودن و قابلیت کاربردی صحرایی آن، روش کاربردی و کارآمد می باشد.