بیان پروتئین نوترکیب Hsp20-Nef به منظور ارزیابی ایمنوژنیسیتی آن در مقابل HIV-1 Nef توسط الایزای غیرمستقیم

 پروتئین Nef به عنوان هدف جذاب برای توسعه واکسن درمانی HIV-1 در نظر گرفته شده است. به علاوه، خواص ایمنی زایی قوی پروتئین های شوک حرارتی (HSPs) منجر به استفاده از آنها به عنوان ایمونومدولاتور و حامل آنتی ژنی برای طراحی واکسن های ساب یونیتی شد. در مطالعه اخیر، بیان پروتئین فیوژن Hsp20-Nef در سیستم بیانی اشرشیا کلی (E. coli) انجام شد و بررسی ایمنوژنیسیتی آن در موش های بالب/سی صورت گرفت.

در ابتدا، بیان پروتئین نوترکیب Hsp20-Nef در سویه های باکتری اشرشیا کلی BL21 و Rosetta توسط SDS-PAGE و وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی منوکلونال ضد Nef بررسی شد. سپس، تخلیص پروتئین نوترکیب توسط تکنیک رنگ آمیزی معکوس انجام شد. درنهایت، توانایی آن برای القای پاسخ آنتی بادی در مقابل آنتی ژن HIV-1 Nef با استفاده از ELISA غیرمستقیم ارزیابی شد.

نتایج ما باند واضح حدود 1230جفت باز مرتبط با فیوژن Hsp20-Nef روی ژل آگارز نشان داد که نشانگر کلونینگ صحیح ژن در وکتور pET28a بود. بیان پروتئین Hsp20-Nef به صورت باند واضح حدود 47کیلودالتون در SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. در سنجش ایمنولوژیکی، پروتئین Hsp20-Nef و نیز پروتئین Nef امولسیفیه شده با ادجوانت فروند به طور مهمی سطح IgG تام را در مقایسه با گروه های دیگر افزایش دادند. به علاوه، ایمنوژنیسیتی Hsp20-Nef بالاتر از Freund’s adjuvant/Nef در رژیم های پروتئینی بود (0.05>p).

پروتئین فیوژن Hsp20-Nef به طور موثری در سیستم پروکاریوتی E. coli بیان شد و به طور مهمی پاسخ آنتی بادی را در مقابل آنتی ژن HIV-1 Nef القا کرد.