تخلیص و تعیین خصوصیت آلژینات لیاز سودوموناس آئروژینوزای موکوئیدی سویه 214

سودوموناس آئروژینوزا پاتوژن فرصت طلبی است که در بیماران مستعد موجب عفونتهای متعددی می شود. توانایی سودوموناس آئروژینوزا درایجاد عفونت های مزمن به خاطر تولید بیوفیلم است که آلژینات پلی ساکارید مهم تشکیل دهنده آن می باشد. بنابراین تخریب آلژینات نقش مهمی در تخریب بیوفیلم بازی می کند. آلژینات لیاز آنزیم مهمی در تخریب آلژینات می باشد. وزن مولکولیPI و ویژگی این آنزیم در باکتری های مختلف و حتی در سویه های یک باکتری متفاوت است. مقدار آلژینات در سویه های موکوئیدی بیشتر ازغیرموکوئیدی ها می باشد. در این مطالعه سودوموناس آئروژینوزا سویه 214 به دلیل تشکیل کلونی های بسیار موکوئیدی برای تهیه آلژینات لیاز انتخاب شد.آلژینات لیاز از فضای پری پلاسمیک سودوموناس آئروژینوزا با استفاده از شوک حرارتی استخراج و برای تعیین فعالیت آن از روش تیوباربیتوریک اسید استفاده شد. این آنزیم بیشترین فعالیت را در محیط TSB نشان داد. غلظت بهینه سدیم آلژینات 0/02mg/ml بود و فعالیت بهینه آن در 20 دقیقه در 3 درجه سانتی گراد مشاهده شد. با پروتوکل دو مرحله ای ترسیب با آمونیوم سولفات و کروماتوگرافی ستونی تعویض آنیونی DEAE-Sepharose Cl-6B آنزیم خالص گردید. با روش SDS-PAGE وزن مولکولی 40 کیلودالتون برای این آنزیم تخمین زده شد.