بررسی اثر سم میکروسیستین از جلبک میکروسیستیس بر روی رده سلولی HepG2 کارسینومای کبد انسان با استفاده از Real -TimePCR

میکروسیستین یک هپتاپپتیدحلقوی است که به عنوان فراوانترین سیانوتوکسین تولیدی با توزیع گسترده جهانی شناخته می شودو رایج ترین هپاتوتوکسین تولید شده توسط سیانوباکترها می باشند.فاقد نفوذ به غشا سلول های مهره داران است به همین دلیل سمیت این سیانوتوکسین ها تنها به اندام هایی محدود می گردد که مانند کبد بیان کننده و انتقال دهنده (ترانسپورتر) آنیونی آلی بر روی غشا سلولی خود باشند. در این مطالعه میزان بیان ژن های BAX وBCL2 در رده سلولی HepG2 تحت تاثیر میکروسیستین با استفاده از تکنیک Real-TimePCR مورد بررسی قرار گرفت تا بتوان با انجام تحقیق و بررسی بیشتر در مورد مکانیسم و نحوه اثر این سم از آن به عنوان یک هدف مناسب برای درمان سرطان کبد استفاده کرد. در ابتدا پاساژ سلولی ،رده سلولی HepG2 انجام شد، سپس تستMTTassay صورت گرفت،در مرحله بعد استخراج RNA وسنتز CDNA صورت گرفت و جهت اطمینان از خلوص نمونه RNA از اسپکتروفتومتر نانودراپ استفاده شد، سپس پرایمرهای اختصاصی و مناسب ژن مورد نظر طراحی و سنتز گشت و با استفاده از Real-Time PCR بیان ژن های Bax وBCL2 سنجیده شد. این سم بیان ژن های BAX را افزایش داده و موجب کاهش ژن های BCL2 به صورت چشمگیری شده است. ژن BAX به عنوان یک پروآپوپتوز بیانش افزایش یافته و هر چقدر HepG2 مدت زمان بیشتری در معرض سم قرار گرفت میزان بیان BAX افزایش یافته و در مقابل بیان BCL2 کاهش و در این حالت سلول به سمت آپوپتوزی شدن پیش رفت.