راه اندازی روش Real-Time PCR جهت تعیین بار پرووایرال ویروس لنفوتروپیک T انسانی نوع I به روش سایبرگرین جهت نمونه های اهداکنندگان خون

استان خراسان در ایران برای ویروسHTLV-1  اندمیک است. با توجه به ناکارآمد بودن آزمایش های سرولوژیکی در شناسایی ویروس ها در دوره کمون، تایید جواب های نامشخص وسترن بلات و خطر انتقال ویروس HTLV-1 از راه خون و فرآورده های خونی، آزمایش Real - Time PCR به روش سایبرگرین راه اندازی شد. نمونه های مورد آزمایش، مربوط به اهداکنندگان خون آلوده به این ویروس در پایگاه انتقال خون استان خراسان رضوی در سال 1396 بودند.

در یک مطالعه تجربی، با استفاده از روش کلونینگ و رسم منحنی استاندارد، آزمایش Real - Time PCR برای تعیین پرووایرال لود راه اندازی شد. ابتدا  DNAژنومی از سلول های تک هسته ای خون محیطی استخراج شد. سپس محصول  PCR ژن Tax ، در یک وکتور کلونینگ قرار داده شد و با رقت سازی، منحنی استاندارد رسم و آزمایش Real - Time PCR با روش سایبرگرین راه اندازی شد.

با استفاده از محصول PCR برای ژن  Tax، وکتور pTZ57/T و باکتریE.Coli  (سوش TG1) کلونینگ انجام شد. صحت کلونینگ با Colony PCR و تعیین سکانس تایید شد. محصول کلونینگ به عنوان استاندارد آزمایش Real -Time PCR  استفاده شد و با رقت سازی، منحنی استاندارد رسم شد. شیب خط منحنی استاندارد 3/3 slope= و 99/0 = 2R بوده که نشان دهنده خطی بودن و کارآیی واکنش آزمایش می باشد.

روش Real -Time PCR  جهت تعیین پرووایرال لود ویروس HTLV-1 مناسب است.