ساخت سویه بیانی مخمر نوترکیب مولد EpEX به عنوان انتخابی مناسب در تشخیص و درمان سرطان

مولکول چسبان سلول اپیتلیال (EpCAM) یک گلیکوپروتئین غشایی است که بیان آن در اکثر تومورهای با منشا اپیتلیالی افزایش می یابد و لذا می تواند در شناسایی و درمان سرطان ها با کمک روش های ایمونولوژیکی به عنوان یک هدف مناسب به کار گرفته شود. لذا تولید نوترکیب این پروتئین به فرم طبیعی حایز اهمیت می باشد. در دو دهه ی گذشته مخمر پیکیا پاستوریس به دلیل دارا بودن مزایای هر دو سیستم بیانی پستاندار و پروکاریوتی، به عنوان میزبان رایج در تولید پروتئین های نوترکیب مطرح بوده است. در این مطالعه پیکیا بیان کننده بخش خارج سلولی EpCAM ساخته شده است.

 ژن بهینه شده ی کدونی مولد پروتئین EpEX در محل های برشی آنزیم های XhoI و XbaI وکتور pPICZαB همسانه سازی شد. سازه نوترکیب با کمک الکتروپوراسیون در سویه GS115 وارد شد. کلون های مثبت با کمک PCR و با استفاده از جفت پرایمر مربوط به ژن AOX1 ارزیابی شدند.

صحت ساخت سازه نوترکیب pPICZαB-EpEX با استفاده از توالی یابی و آنالیز آنزیمی با استفاده از آنزیم های XhoI و XbaI (باندهای 3506 و 843 جفت باز) هم چنینBamHI  (باندهای 3651 و 698 جفت باز) تایید شد. نتایج حاصل از غربالگری بر پایه PCR، زمانی که دو پرایمر مربوط به ژن AOX1 به کار گرفته شد، نشان دهنده ی حضور دو باند (2200 و 1345 جفت باز) در کلون های نوترکیب بود.

 ساخت سویه مهندسی شده مولد EpEX در این مطالعه تایید شد. از این سویه ساخته شده می توان در تولید پروتئین نوترکیب EpEX جهت اهداف تشخیصی و درمانی استفاده کرد