خالص سازی هورمون رشد انسانی تولید شده به شکل محلول از سویه نوترکیب اشریشیاکلی در مقیاس آزمایشگاهی

هورمون رشد انسانی یا سوماتوتروپین یک پلی پپتید تک زنجیره است که دارای وزن مولکولی kDa22 بوده و 191 واحد آمینو اسیدی دارد. بیان بالای هورمون رشد انسانی در سیتوپلاسم اغلب منجر به تشکیل اینکلوژن بادی میگردد. فرآیند تخلیص هورمون رشد انسانی از اینکلوژن بادی ها نیازمند به فرآیند بازتاخوردگی است تا پروتئین به شکل طبیعی خود حاصل شود که فرایند پیچیده ای می باشد و اغلب راندمان بالایی ندارد. از این رو در فرایندهای تولیدی بیان بالای فرم محلول همواره مورد توجه بوده است.

در این تحقیق از باکتری E. coli حاوی پلاسمید pET32a(+)-Trx-His6-hGH استفاده شد. به منظور دستیابی به میزان بالای تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در محیط سیتوپلاسم بفرم محلول از برچسب Trx و برای خالص سازی آن از برچسب هیستیدینی استفاده شد. باکتری در محیط LB و TB در دمای 0C 25 رشد داده شد. فرایند خالص سازی بر اساس روش کروماتوگرافی افینیتی با استفاده از ژل Ni-NTAانجام گردید.

نتیجه حاصل بر اساس آنالیز ژل الکتروفورز بیان 55 % هورمون رشد نوترکیب را نشان داد که تقریبا 7/33 % آن به شکل محلول و 8/18% آن به شکل نامحلول تولید شده است. میزان فیوژن پروتئین هورمون رشد انسانی حاصل از تخلیص g1 رسوب سلولی mg 4/22 تعیین گردید.

با استفاده از برچسب Trx فیوژن پروتئین هورمون رشد انسانی نوترکیب محلول به خوبی بیان شده است. همچنین با استفاده از روش خالص سازی بر اساس دنباله هیستیدینی، خلوص هورمون رشد انسانی 91% و بازدهی کل 38 % بدست آمد.