جداسازی، همسانه سازی، بررسی بیوانفورماتیکی ویژگی های پروتئینی و تحلیل بیان ژن دی هیدروبنزوفنانتریدین اکسیداز (DBOX) گیاه دارویی شقایق (.Papaveer somniferum L)

گیاه شقایق P. somniferum از مهم ترین گیاهان دارویی به شمار رفته و تنها منبع بسیاری از آلکالوییدهای بنزیل ایزوکوینولینی (BIAs) محسوب می گردد. آلکالوییدهای بنزیل ایزوکوینولینی گروه بزرگ و پیچیده ای از متابولیت های ثانویه گیاهی بوده که از خواص دارویی و درمانی قابل توجهی بر خوردار هستند. در مطالعه حاضر (در آزمایشگاه بیوتکنولوژی دانشگاه لرستان در سال 1393-1395) به منظور جداسازی و همسانه سازی ژن DBOXژنوتیپ ایرانی گیاه شقایق، ابتدا توالی مورد نظر با استفاده از آغازگرهای طراحی شده، تکثیر و سپس قطعه تولید شده به پلاسمید pTZ57R/T منتقل گردید. نتایج توالی یابی قطعه 1614 جفت بازی را معین نمود که با 100 درصد همسانی با ژن DBOX گیاه شقایق شباهت داشت. توالی پروتئینی کد شده توسط این ژن مورد تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیکی قرار گرفت و سه دامنه عملکردی FAD binding، Berberine و FAD/FMN-containing dehydrogenase در توالی پروتئینی و وجود یک سیگنال پپتید در انتهای آمینی آن مشخص گردید. همچنین نتایج نشان داد که بیشترین تجمع پروتئین کد شده توسط ژن DBOX در ناحیه غشای سلولی و پلاسمایی بوده و بیشترین عملکرد این پروتئین در ناحیه خارج سلولی می باشد. جهت تجزیه و تحلیل بیان ژن DBOX و تعیین الگوی بیانی آن در بافت های مختلف گیاهی، تعداد 5 کتابخانه ترنسکریپتومی حاصل از داده های RNA-seq گیاه شقایق با شماره های دسترسی ERX651037، ERX651023، ERX651056، ERX651082 و ERX651062 از پایگاه SRA سایت NCBI دریافت شد. تعداد توالی های حاصل از همردیفی بین بافت های مختلف با استفاده از آزمون های آماری Fisher exact test و Chi-squared 2X2 مقایسه گردید. نتایج تجزیه و تحلیل بیان ژن با استفاده از تکنیک real time RT-PCR و آزمون های In silico نشان داد که بیشترین سطح بیان این ژن در ریشه و کمترین آن در ساقه می باشد.