کلونینگ و بررسی بیان ژن کد کننده کاتپسین L کنه ریپی سفالوس آنولاتوس

کنه ها از مهم ترین انگل های خارجی می باشند که باعث ایجاد زیان اقتصادی فراوانی در صنعت دامپروری می شوند. لذا تلاش در جهت حذف یا کاهش آن ها بر روی دام ها بسیار ضروری می باشد. سیستیین پروتیازها از جمله ترکیباتی هستند که نقش مهمی را در اعمال فیزیولوژیک کنه ها بر عهده دارند و کاندید مناسبی برای دست یابی به واکسن ضد کنه می باشند. کاتپسین ها یکی از مهم ترین سیستیین پروتیاز ها می باشند.

هدف از این مطالعه، کلونینگ و بیان قطعه ژنی کاتپسین L کنه ریپی سفالوس آنولاتوس به منظور بررسی ایمنوژنیسیتی آن بوده است.

پس از جمع آوری کنه ها و تشخیص جنس و گونه آن ها اقدام به کشت کنه ها گردید. سپس استخراج RNA از نوزاد کنه ها، سنتز cDNA با استفاده از پرایمر اختصاصی کاتپسین و تکثیر آن با روش RT-PCR انجام پذیرفت. قطعه ژنی موردنظر در پلاسمید بیانی pQE30 کلون شد. در ادامه توالی کوتاه تری از ژن کاتپسین (654 جفت باز) نیز بصورت پلاسمید صناعی تهیه گردید. بیان پروتئین حاصل از هر دو پلاسمید نوترکیب در سیستم بیان پروکاریوتی E.ColiBL21 انجام و ایمنی زایی پروتئین های نوترکیب حاصل از آن با روش های سرولوژیک دات بلات و وسترن بلات در مواجهه با سرم خرگوش های چالش یافته با این پروتئین ها و گوساله های آلوده به کنه مورد بررسی و مقایسه قرار گرفت.

نتایج مطالعه حاضر نشان داد پروتئین حاصل از پلاسمید نوترکیب صناعی به دلیل حلالیت بیشتر بیان و تخلیص بالاتری داشت. همچنین سرم خرگوش چالش یافته با این پروتئین ها، قابلیت شناسایی هر دو پروتئین نوترکیب را داشت. اما شدت واکنش سرم گوساله های آلوده به کنه با پروتئین های نوترکیب تولید شده کمتر بود.

هر چند شدت واکنش سرم گوساله های آلوده به کنه با پروتئین های نوترکیب در مقایسه با سرم خرگوش کمتر بود، اما این امر با توجه به پنهان بودن آنتی ژن کاتپسین در روده کنه دور از ذهن نبود. در مجموع پروتئین نوترکیب کاتپسین ال می تواند به عنوان یک گزینه مناسب در جهت ایمن سازی گوساله علیه آلودگی به کنه ریپی سفالوس آنولاتوس به کار رود، هر چند بررسی های بیشتر در این زمینه ضروری به نظر می رسد.