کلون، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا H1N1 انسانی در رده ی یوکاریوتیک سلول حشره با استفاده از وکتور باکولوویروس

 ویروس آنفلوانزا H1N1 به عنوان عامل بیماری زا و تهدید کننده ی حیات انسان مطرح می شود. واکسیناسیون، از راه های موثر برای پیش گیری و مهار بیماری آنفلوانزا است. تولید پروتئین نوترکیب هماگلوتینین در سیستم بیانی باکولوویروس، در بستر سلول یوکاریوت حشره (Sf9) به عنوان یک راهکار موثر پیشنهاد شده است.

 توالی ژن هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا H1N1 از National Center for Biotechnology Information (NCBI) استنتاج و پس از طراحی پرایمر اختصاصی، توالی با استفاده از هضم آنزیمی در پلاسمید pFastBacHTA کلون گردید و برای تولید یک بکمید نوترکیب به سلول DH10Bac انتقال داده شد. پس از استخراج پلاسمید مربوط و تایید صحت کار، به داخل سلول حشره ترانسفکت گردید و بعد از بیان پروتئین توسط سلول Sf9، با روش Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) و Western blot، حضور پروتئین نوترکیب تایید شد.

 ژن هماگلوتینین با طول 654 جفت باز در پلاسمید pFastBacHTA به کمک دو آنزیم BamHI و Xhol ساب کلون گردید. سلول حشره بعد از دریافت بکمید نوترکیب، پروتئینی به وزن تقریبی 60 کیلودالتون را بیان نمود. پس از استخراج پروتئین، با روش های SDS-PAGE و Western blot تایید انجام گرفت و با روش Lowry، غلظت پروتئین اندازه گیری شد.

سیستم بیانی باکولوویروس برای تولید پروتئین هایی با ساختار پیچیده مفید است. به طور کلی، از این طرح می توان به این نتیجه رسید که این پروتئین در سلول حشره به میزان بالایی بیان می شود و به دلیل تشابه سیستم آن با سیستم انسانی، می تواند در آینده به عنوان جایگزین مناسب برای تخم مرغ های جنین دار در زمینه ی واکسیناسیون مورد استفاده قرار گیرد.