طراحی کیت تشخیصی کلامیدیا تراکوماتیس در زنان علامت دار به روش Real time PCR

کلامیدیا تراکوماتیس یکی از شایع ترین علل عفونت های منتقل از راه جنسی در سراسر جهان است. غربالگری زنان برای عفونت های کلامیدیایی در کشورهای درحال توسعه به دلیل موثر نبودن روش های تشخیصی در دسترس، بسیار موردتوجه قرارگرفته است. هدف از انجام این تحقیق دستیابی به روشی است که تشخیص عفونت کلامیدیا تراکوماتیس را در زنان دارای علامت سهولت ببخشد.

در این مطالعه تعداد 50 نمونه بالینی (واژینال) از زنان علامت دار جمع آوری شد. پس از استخراج DNA، توالی ژن OMP1 به عنوان ژن منتخب از بانک ژن استخراج گردید. سپس، با استفاده از نرم افزار Mega6 پرایمرهای اختصاصی طراحی گشت. با نمونه های DNA استخراج شده PCR گذاشته شد و صحت پرایمرهای طراحی شده تایید شد. به منظور ساخت کنترل مثبت محصول PCR در وکتور، کلون شد. جهت تعیین حساسیت Real time PCR، رقیق سازی DNA از کنترل مثبت صورت گرفت و با رقت های مختلف Real time PCR گذاشته شد و همچنین جهت تعیین اختصاصیت Real-time PCR، DNA باکتری های ناحیه واژن استخراج و Real-time PCR انجام شد.

در این تحقیق توانستیم به وسیله تکنیک مولکولی پیشرفته Real-time PCR کیتی طراحی کنیم که دارای 10 پیکوگرم حساسیت و 100 درصد اختصاصیت در تشخیص عفونت کلامیدیایی در زنان علامت دار است.

 با پرایمرهای طراحی شده و روش ریل تایم می توان تشخیص 100 درصد نسبت به عفونت های کلامیدیا داشت.