مقایسه وکتورهای بیانی pET32a و pET25b در بیان توالی پلی اپیتوپی سنتز شده از آنتی ژن های انگل لیشمانیا اینفانتوم

امروزه از روش های مولکولی در تشخیص بیماری ها، تولید واکسن ها، داروها و تولید پروتئین های نوترکیب استفاده می شود، لذا یکی از مراحل مهم انتخاب وکتور مناسب برای کلون و بیان ژن های هدف است. از آنجا که بیان پلی ژن های سنتتیک یا اصطلاحا آنتی ژن های کایمریک با وزن مولکولی بالا نیاز به شرایط ویژه ای دارد، مطالعه حاضر به هدف ارزیابی میزان اهمیت نوع وکتور برای بیان اینگونه آنتی ژن ها انجام شد.

 توالی 1250 جفت بازی متشکل از اپی توپ های هشت آنتی ژن مهم انگل لیشمانیا اینفانتوم طراحی و توسط شرکت بیوماتیک (کانادا) سنتز شد، توالی به صورت جداگانه درون دو وکتور بیانی pET25b و pET32a کلون و سپس به باکتری (DE3) E.coli BL21ترانسفورم و تحت شرایط مشابه بیان شدند. لیزابه باکتری توسط SDS PAGE بررسی و با وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت.

نتایج SDS PAGE و وسترن بلات نشان داد که تولید پروتئین نوترکیب کامل و بی نقص توسط وکتور pET25b موفقیت آمیز نبوده است. این در حالی بود که پروتئین نوترکیب حاصل از بیان توالی پلی اپی توپی مذکور در وکتور pET32a به صورت موفقیت آمیزی تولید و تایید گردید.

با توجه به بیان موفقیت آمیز توالی پلی اپی توپی درون وکتور pET32a و شناسایی و تایید پروتئین مربوطه، از طرفی عدم موفقیت حصول پروتئین در وکتور pET25b  نشان داد که در مورد بیان برخی توالی های موزاییکی خاص کم بودن ویژگی حلالیت ممکن است به طور کلی دستیابی به پروتئین را با مشکل مواجه کند بنابراین انتخاب نوع وکتور بیانی باید با دقت بیشتری صورت گیرد.