کلونینگ و بیان ژن اینترلوکین15 در باکتری E. coli سویه Rosetta (DE3)

اینترلوکین15 (IL-15)، سایتوکاینی است که به واسطه فعالیت های فیزیولوژیکی آن می تواند در درمان های ضدسرطان نقش ایفا کند. IL-15 باعث تمایز، تکثیر، فعال شدن و بقای سلول های کشنده طبیعی می شود و بقای لنفوسیت های T خاطره ای را بهبود می بخشد. از آنجایی که راندمان تولید و تخلیص این سایتوکاین عمدتا پایین است، علی رغم پیشرفت های اخیر، همچنان بهینه کردن شرایط تولید، ارزشمند است. بنابراین در مطالعه حاضر، اقدام به کلون و بیان ژن IL-15 انسانی در باکتری متفاوت با سویه های قبلی شد و به جای بیان در باکتری E. coli سویه رایج BL21، از سویه Rosetta (DE3) استفاده شد که قادر است با استفاده از کدون های نادری که در باکتری کمتر مورد استفاده قرار می گیرند، بیان ژن های یوکاریوتی را بهتر از سویه های دیگر انجام دهد، به طوری که پروتئین بیان شده شباهت بیشتری به پروتئین انسانی داشته باشد. پس از سنتز ژن IL-15، توالی مورد نظر در وکتور بیانی باکتریال pET28a کلون شد و پس از تایید با کلنیPCR، هضم آنزیمی با آنزیم های BamHI و XhoI و مشاهده باند 391 بازی روی ژل آگارز و تعیین توالی، در باکتری E. coli سویه Rosetta (DE) ترانسفورم شد. القای بیان در جذب نوری 6/0 در OD600 و در حضور 1میلی مولار ایزوپروپیل- بتا- دی- تیوگالاکتوپیرانوزید (IPTG) انجام شد. مشاهده باند 15کیلودالتونی روی ژل SDS-PAGE و سپس انجام وسترن بلات به کمک آنتی بادی اختصاصی تجاری علیه IL-15، نشان از درستی فرآیند بیان داشت. راندمان بیان به کمک دانسیتومتری با نرم افزار Fiji حدود 37% تخمین زده شد. با توجه به اینکه بیان ژن انسانی IL-15 در سویه باکتریایی E. coli Rosetta (DE3) انجام شده است، انتظار می رود که در مطالعات بعدی، عملکرد مناسبی از خود نشان دهد.