Purification of Functional HEV-ORF2 Protein from Inclusion Bodies for Vaccine and Diagnostic Applications
Message:
Abstract:
Introduction

Hepatitis E virus (HEV) causes emerging diseases in poor regions of the world. The ORF2 is the only protein encoded by the virus to make the viral capsid. The aggregation of proteins into inclusion bodies (IBs) while expressing ORF2 is a major challenge in bioengineering.

Methods

The ORF2 conserved sequence was expressed in Escherichia coli BL21 and assessed by a modified SDS-PAGE containing a weak denaturing environment to solubilize the recombinant ORF2 protein and Western blotting. The protein of interest was evaluated by secondary structure prediction using SOPMA, homology modeling by I-TASSER and Circular Dichroism analyses. The function of the recombinant protein was investigated by an in-house ELISA using serum specimens of HEV infected patients.

Results

The solubilized form of ORF2 protein was successfully expressed in E. coli BL21 and was confirmed by SDS-PAGE and Western blotting. Secondary structure prediction, homology modeling and CD analysis of the protein of interest demonstrated that the native structure of ORF2 was almost intact. The specific anti-HEV antibody was detected using this recombinant protein and an in-house ELISA test.

Conclusion

We achieved new combinations of chemical agents, consisted of low concentrations of urea and detergents to overcome the aggregation of ORF2 protein in IBs inside E. coli BL21.

Article Type:
Research/Original Article
Language:
English
Published:
Vaccine Research, Volume:7 Issue: 18, 2020
Pages:
44 - 49
magiran.com/p2170586  
برخی از خدمات از جمله دانلود متن مقالات تنها به مشترکان مگیران ارایه می‌گردد. شما می‌توانید به یکی از روش‌های زیر مشترک شوید:
اشتراک شخصی
در سایت عضو شوید و هزینه اشتراک یک‌ساله سایت به مبلغ 400,000ريال را پرداخت کنید. همزمان با برقراری دوره اشتراک بسته دانلود 100 مطلب نیز برای شما فعال خواهد شد!
پرداخت با کارتهای اعتباری بین المللی از طریق PayPal امکانپذیر است.
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی همه کاربران به متن مطالب خریداری نمایند!
توجه!
  • دسترسی به متن مقالات این پایگاه در قالب ارایه خدمات کتابخانه دیجیتال و با دریافت حق عضویت صورت می‌گیرد و مگیران بهایی برای هر مقاله تعیین نکرده و وجهی بابت آن دریافت نمی‌کند.
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.