جداسازی، شناسایی و تعیین هویت مولکولی گونه های کریپتوسپوریدیوم در اسهال گوساله ها به روش multiplex nested-PCR

تشخیص گونه های کریپتوسپوریدیوم براساس خصوصیات مورفولوژی بسیار محدود بوده و به تنهایی فاقد ارزش تاکسونومیک است، و لذا استفاده از روش های مولکولی این محدودیت ها را تا حدودی برطرف می سازد.

هدف از این مطالعه تعیین ژنوتیپ های غالب کریپتوسپوریدیوم در گوساله های مبتلا به اسهال بود.

مطالعه در گوساله های کمتر از 3 ماه و برای مدت 2 سال انجام شد. در طول دوره مطالعه، 160 نمونه مدفوع از گوساله های جوان جمع آوری شده و ابتدا از طریق میکروسکوپی و سپس با استفاده از تکنیک های مولکولی مورد بررسی قرار گرفت. مدفوع از جهت حضور اواوسیست های کریپتوسپوریدیوم توسط روش شناورسازی با آب شکر شیتر و به دنبال آن روش رنگ آمیزی ذیل نلسون  مورد بررسی قرار گرفت. دی ان آ انگل استخراج و پروتکل multiplex nested-PCR براساس ژن 18srRNA جهت شناسایی سه گونه سازگار در گاو (یعنی کریپتوسپوریدیوم اندرسونی،  کریپتوسپوریدیوم بوویس و کریپتوسپوریدیوم رایانه) به علاوه گونه مشترک بین انسان و دام یعنی کریپتوسپوریدیوم پارووم انجام شد.

110 نمونه مدفوع از دامداری های موجود در استان البرز و 50 نمونه مدفوع نیز از دامداری های شهر شاهرود جمع آوری گردید. از 160راس حیوان مورد آزمایش 90 راس ماده و 70 راس نر بودند. در مجموع در میان 160 راس دام مورد آزمایش 85 مورد (12/53 درصد) مبتلا به اسهال بودند که 55 مورد (37/34درصد) از این تعداد حیوان تحت آزمایش با استفاده از رنگ آمیزی ذیل نلسون مثبت تشخیص داده شدند. از آنجایی که تمام موارد مثبت مربوط به نمونه های اسهالی و مرتبط با گوساله های زیر یک ماه بود، ارتباط معنی داری مابین وضعیت اسهال و حضور این انگل مشاهده گردید (05/0 <p). از نظر توزیع فصلی تفاوتی در میزان موارد اسهالی و موارد مثبت انگلی مشاهده نشد. حضور باند 305 جفت بازی در کلیه نمونه های مثبت ذیل نلسون موید حضور گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در تمامی نمونه ها بود. 

نتیجه گیری نهایی:

 گوساله های شیرخوار بیشتر با کریپتوسپوریدیومپارووم آلوده می شوند که تحقیق حاضر نیز موید این مطلب بود.