خالص سازی و تجزیه و تحلیل بیولوژیکی آنتی ژن های خاص (ESAT6/CFP10) مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

بیماری زایی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (Mtb) مربوط به پروتئین های با وزن مولکولی پایین آن به طور عمده ESAT-6 و CFP10 است که برای تشخیص سل بسیار خاص و بالقوه هستند. این تحقیق بر جدا سازی، خالص سازی و تعیین خصوصیات پروتئین های با وزن مولکولی پایین Mtb تمرکز دارد. کشت های Mtb به ترتیب با حرارت در 68 ºC به مدت 90 دقیقه و ºC 100 به مدت 3 ساعت غیرفعال گردیدند. کشت های غیرفعال، فیلتر شدند و پروتئین های مایع رویی در دو مرحله با آمونیوم سولفات در دمای ºC 4 رسوب داده شدند. رسوبات حاصله دیالیز شدند و ژل کروماتوگرافی (G-50) انجام گرفت. فراکسیون های به دست آمده برای تعیین غلظت پروتئین و وزن مولکولی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. کمپلکس پروتئینی ESAT-6 و CFP10 در فراکسیون خالص شده با وسترن بلات تایید شد. از روش سنجش حساسیت خوکچه هندی برای تخمین قدرت بیماری زایی فراکسیون خالص شده در مقایسه با PPD استاندارد استفاده شد. حداکثر مقدار پروتئین های با وزن مولکولی پایین آمونیوم سولفات 20% رسوب داده شدند. تجزیه و تحلیل SDS-PAGE باندهای پروتئینی تقریبا 10-15 کیلو دالتونی را نشان داد. خلوص پروتئین حدود 95≤، بود که توسط SDS-PAGE تایید گردید. حضور کمپلکس ESAT-6/CFP10 با تجزیه و تحلیل وسترن بلات تایید شد. فراکسیون های خالص شده هیچ واکنش متقاطعی با سویه BCG یا مایکوباکتریوم اویوم نشان ندادند. به نظر می رسد ESAT-6/CFP10 خالص شده با روش آمونیوم سولفات برای توسعه کیت تشخیصی برای تشخیص Mtb مناسب می باشد.