دستکاری ژنتیکی سلولهای بنیادی مزانشیمی انسانی مشتق از چربی با miR-34a

ژن تراپی ایمن و موثر به عنوان یکی از اهداف درمانی در بسیاری از بیماری ها در نظر گرفته می شود. با توجه به نقش مهم سلول های بنیادی در سل تراپی، این مطالعه با هدف تولید سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از چربی انسان (hASC) با افزایش بیان miR-34a انجام شد.

توالی پیش ساز hsa-mir-34a  در وکتورPCDH  لنتی ویروس کلون شد. وکتور نوترکیب و دو وکتور کمکی یعنی psPAX و pMD2  با روش کلسیم فسفات به داخل HEK-293T  منتقل شدند. سوپ ویروسی جمع آوری و با اولترا سانتریفیوژ  تغلیظ شد. سلول هایHEK-293T ترانسدیوس شده در روز چهارم با فلوسایتومتری ارزیابی شدند. پس از تعیین غلظت ویروسی، سلول های hASC با ویروس های تغلیظ شده ترانسدیوس شدند. استخراج RNA و سنتز cDNA به منظور ارزیابی میزان بیان miR-34a با Real Time PCR انجام شد.   

یافته  ها: 

توالی پیش ساز hsa-mir-34a   کلون شده در وکتور PCDH با colony-PCR و DNA sequencing تایید شد. ترانسداکشن سلول های HEK-293T و hASC  در زیر میکروسکوپ معکوس فلورسنت دار و فلوسایتومتری مورد تایید قرار گرفتند. ارزیابی میزان بیان miR-34a در سلول های آلوده به ویروس نوترکیب نشان داد که نسبت بیان miR-34a در گروه تست به طور معنی داری بیشتر از گروه کنترل بود (001/0=P).

نتیجه  گیری:

 این مطالعه نشان دادکه از سیستم های لنتی ویروس ها می توان برای وارد کردن ژن های خارجی نظیر miR-34a  به سلول ها استفاده کرد. همچنین این مطالعه نشان داد که سلول های بنیادی دستکاری شده ژنتیکی به عنوان delivery system برای انتقال miR-34a و یا هر ژن دیگری می توانند استفاده شوند.