بررسی کارآیی متدهای تخلیص ویزیکول های خارج سلولی مشتق از بیفیدوباکتریوم بیفیدوم (یک مطالعه مقایسه ایی)

باکتری ها به طور طبیعی وزیکول هایی در مقیاس نانو که حاوی طیف وسیعی از بیومولکول ها مانند پروتئین ها، DNA و RNA هستند را تولید می کنند. به این ویزکول ها، وزیکول های خارج سلولی (EVs) گفته می شود. این وزیکول ها نقش مهمی در تعامل میزبان و میکروبیوتا دارند. برای جداسازی EVs روش های مختلفی ارایه شده و هر روش دارای مزایا و همچنین محدودیت هایی نیز می باشد. در مطالعه حاضر ما کارآیی دو روش استخراج EVs را مورد بررسی قرار داده ایم.

مواد و روش کار: 

بیفیدوباکتریوم بیفیدوم در محیط کشت MRS broth در شرایط بیهوازی کشت داده شد. در پروتکل اول از روش اولتراسانتریفیوژ استفاده گردید (روش اولترا) و در روش دوم از اولتراسانتریفیوژ استفاده نشد (روش غیراولترا). بعد از استخراج ویزیکول ها، میزان پروتئین آن ها توسط دستگاه NanoDrop اندازه گیری شد. از روش SDS-PAGE برای مقایسه الگوی پروتئین EVs استفاده شد. تصاویر SEM از نمونه ها گرفته شده و اندازه آن ها توسط نرم افزار Digimizer ارزیابی شد.

نتایج نشان داد که EVs جدا شده با روش اولترا به طور معنی داری میزان پروتئین بالاتری نسبت به روش غیر اولترا(به ترتیب 3/42 و 0/26 mg/ml) داشتند. روش اولترا در مقایسه با روش غیراولترا EVs بیشتر و بزرگتری (حداکثر 235 نانومتر و 117 نانومتر به ترتیب) را جدا کرده بود. همچنین ، الگوی پروتئینی EVs در هر دو روش مشابه بودند.

نتایج ما نشان داد که روش اولترا سانتریفیوژ روش مناسبتری برای جداسازی EVs بیفیدوباکتریوم بیفیدوم بوده و ویزیکول های بیشتر، با پروتئین بالاتر و اندازه مناسب تر تخلیص می کند. با این حال ، مطالعات بیشتری برای تایید نتایج ما مورد نیاز است.