بررسی الگوهای بیان High temperature requirement A2 (HtrA2) در رده ها و بافت های سلولی مختلف و تولید آن در میزبان پروکاریوتی

HtrA2 سرین پروتیاز میتوکندریایی است که تقریبا در همه بافتها بیان میشود و تحت شرایط استرسی این پروتیاز به یک فاکتور پروآپوپتوزی تبدیل میشود و در القای آپوپتوز شرکت میکند. این پروتئین احتمالا دارای فعالیت چاپرونی نیز بوده و در تاخوردن مناسب پروتئین ها نقش دارد. باتوجه به اهمیت آنزیم HtrA2 در القای آپوپتوز و ارتباط آن با برخی بیماری ها، الگوی بیان پروتئین HtrA2 در رده های سلولی طبیعی و برخی رده های بیماری بررسی شد. نتایج PCR نشان داد که ژن HtrA2 در سلول های طبیعی معده بیان می شود ولی در سلول های سرطانی معده بیان نمی شود. هم چنین در سلول های سرطانی ریه و سلولهای آدنوکارسینومای کولون انسان (رده سلولی SW480) نیز بیان دیده شد. با توجه به بیان متفاوت ژن HtrA2 در رده های سلولی های طبیعی و بیماری، الگوی مشخصی که نشان دهنده ارتباط بیان این پروتیاز با بیماری باشد مشاهده نگردید. در مرحله بعد با توجه به اهمیت HtrA2 ، قطعه cDNA مربوط به آنزیم HtrA2 درون وکتورpET21a(+) کلون و وکتور نوترکیب به سلول های مستعد E.coli سویه TOP10 منتقل شدند. در نهایت بیان پروتئین توسط SDS-PAGE آنالیز شد. سپس پروتئین تولید شده توسط ستون نیکل-آگارز خالص سازی شد و فعالیت پروتیازی آن توسط سوبسترای کازیین و با روش اسپکتروفتومتری سنجیده شد. نتایج نشان داد که آنزیم تولید شده فعال است و بنابراین HtrA2 تولید شده ساختار طبیعی داشته و می توان از آن در جهت تحقیقات بعدی استفاده نمود.