استخراج و تخلیص لاکتوفرین از شیر شتر و بررسی فعالیت آمیلازی آن

لاکتوفرین در ترشحات موکوسی، شیر و کلستروم یافت می شود و دارای فعالیت های ضدمیکروبی، جذب آهن و افزایش پاسخ های ایمنی می باشد. لاکتوفرین قابلیت تجزیه نشاسته و ATP را داراست. هدف از این مطالعه، بررسی حفظ فعالیت آنزیمی لاکتوفرین شیرشتر پس از خالص سازی توسط کروماتوگرافی تبادل یونی بود.

 در این تحقیق آزمایشگاهی پس از گرفتن شیر شتر، چربی و کازیین حذف و لاکتوفرین توسط کروماتوگرافی تبادل یونی با استفاده از CM-Sephadex-C-50 خالص گردید. مقادیر Km و Vmax فعالیت آمیلازی لاکتوفرین، pH و دمای بهینه واکنش مشخص شد. بدین منظور از محلول 5/0 درصد نشاسته ذرت به عنوان سوبسترا و از آزمایش فعالیت یدی برای تعیین مقادیر مصرف نشده استفاده شد. دمای بهینه فعالیت آمیلازی توسط کروماتوگرافی کاغذی تعیین شد.

 نتایج حاصل از بررسی، حضور لاکتوفرین را در محدوده 73کیلودالتون و غلظت آن را به طور متوسط  µg/ml60 نشان داد. مقادیر Km و Vmax به ترتیب mg.ml-12 وmg.ml-1.min-1  0/2 تعیین شد. همچنین لاکتوفرین فعالیت آمیلازی گسترده ای در محدوده pH های 4 تا 7 داشت و بیش ترین فعالیت را در بpH برابر 5 دارا بود. فعالیت آمیلازی لاکتوفرین در دمای C 40 به حداکثر مقدار خود رسید. هضم آنزیمی سبب هیدرولیز نشاسته و تبدیل آن به قندهای مالتوز و گلوکز شد.

بر اساس یافته های مطالعه حاضر روش کروماتوگرافی تبادل یونی می تواند سبب جداسازی لاکتوفرین با خلوص بالا گردد. فعالیت آمیلازی بالای لاکتوفرین نشان داد که ساختار پروتیینی آن پس از عبور از ستون کروماتوگرافی حفظ شده است.