Optimization of Expression and Purification of some Model Histidine-tagged Recombinant Proteins: MiRGD, GNH, HNH, Firefly Luciferase and Human DT-Diaphorase

Message:
Article Type:
Research/Original Article (دارای رتبه معتبر)
Abstract:
Higher rates of protein expression lead to the accumulation of proteins as inclusion bodies. In contrast, the expression of soluble proteins needs to be optimized to reduce the amount of accumulated proteins. Therefore, obtaining a high amount of the desired his- tag recombinant proteins always requires a balance between expression rate and accumulation. Inducer concentration, time, and temperature of induction are the main variable in the level of soluble protein or inclusion bodies expression. In summary, if the higher concentrations of the protein are toxic or tend to be aggregated inside cells, higher ODs, lower IPTG concentrations, and shorter expression times can be effective in formation of inclusion bodies. The standard purification process can also be optimized based on the Physicochemical properties, such that, in addition to increasing yield in the expression step, the activity and concentration of the desired protein is maintained in the purification step. In this study, we obtained the results of extraction of three different peptides MiRGD, GNH and HNH, and two proteins firefly mutant red-emitter luciferase, and human DT-diaphorase proteins by altering these variables on expression as well as purification conditions. Optimization of the protocols in Ni-NTA affinity chromatography of recombinant proteins with denaturants for MiRGD, GNH and HNH brought about with increase of purified protein concentrations from 0.21, 0.4, and 0.16 mg/ml in the initial attempt to 2.9, 3.4 and 2.6 mg/ml in the optimized experiment respectively. Non-denaturing optimization of purification for mutant luciferase and human diaphorase produced 4.1 and 2.6 mg/ml, respectively.
Language:
English
Published:
Biomacromolecular Journal, Volume:7 Issue: 2, Autumn 2021
Pages:
93 to 102
https://www.magiran.com/p2551112  
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با ثبت ایمیلتان و پرداخت حق اشتراک سالانه به مبلغ 1,490,000ريال، بلافاصله متن این مقاله را دریافت کنید.اعتبار دانلود 70 مقاله نیز در حساب کاربری شما لحاظ خواهد شد.

پرداخت حق اشتراک به معنای پذیرش "شرایط خدمات" پایگاه مگیران از سوی شماست.

اگر مقاله ای از شما در مگیران نمایه شده، برای استفاده از اعتبار اهدایی سامانه نویسندگان با ایمیل منتشرشده ثبت نام کنید. ثبت نام

اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.
In order to view content subscription is required

Personal subscription
Subscribe magiran.com for 70 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!