کلونینگ و بیان ژن کد کننده پروتئین Csu از باکتری اسینتوباکتر بومانی مقاوم به کارباپنم به منظور ایجاد واکسن ژنی نوترکیب

در این مطالعه تجربی، ژن کد کننده ی پروتئین چاپرون بیوژنز فیمبریال Csu از باکتری اسینتوباکتر بومانی مقاوم به کارباپنم به روش PCR تکثیر شد. ژن مذکور به ترتیب در ناقل های T و pcDNA3.1 کلرن سازی و ساب کلون گردید. تایید صحت کلونینگ ژن با سه روش PCR، آنزیم های برش دهنده و تعیین توالی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس، مقدار 100 میکرولیتر از غلظت 100ng/ml از ناقل نوترکیب نهاییpcDNA3.1-csuC به عضله 4 سر ران موش BALB/c تزریق گردید و بیان ژن هدف در عضله 4 سر ران موش با روش RT-PCR بررسی شد و نتایج اختلاف بیان در سطوح معناداری P<0.05، P<0.01 و P<0.001 گزارش شد.مشاهده باند 831 جفت بازی پس از انجام RT-PCR، در عضله 4 سر ران موش در گروهpcDNA3.1-csuC نسبت به گروه شاهد (PBS)، موید بیان ژن csuC در عضله 4 سر ران موش می باشد. در گروه هدف میزان بیان ژن هدف پس از 2 روز افزایش بیان قابل توجهی را نشان داد. این افزایش بیان تا روز 30 پس از تزریق به بالاترین سطح خود رسید و اختلاف بیان در سطح P<0.001 معنادار بود. افزایش بیان ژن 40 روز پس از تزریق به سطح معناداری P<0.01 کاهش یافت. این کاهش میزان بیان تا روز 60 پس از تزریق ادامه داشت (P<0.001).سازواره نوترکیبpcDNA3.1-csuC ساخته شده در این تحقیق توان بیان ژن csuC اسینتوباکتر بومانی را در عضله 4 سر ران موش دارد. همچنین، سازوارهpcDNA3.1-csuC از پتانسیل لازم برای بررسی به عنوان واکسن ژنی در تحقیقات آینده برخوردار است.