ارزیابی میزان بقای تخمک های گاو در شرایط آزمایشگاهی پس از انجماد شیشه ای در نی های شیشه ای

هدف از مطالعه حاضر ارزیابی استفاده از نی های شیشه ای (GCM) برای انجماد شیشه ای (Vitrification) تخمک های گاو است. پس از جمع آوری تخمدان های گاو از کشتارگاه، تخمک های موجود روی آنها مکیده و 5 تا 6 بار در محیط شستشو (TCM-199 + 20% FBS) شسته شدند سپس به طور تصادفی به دو گروه آزمون و شاهد تقسیم گردیدند. پیش از شروع انجماد شیشه ای، ابتدا تخمک ها در محلول انجمادی اول] 10% ethylene glycol (EG); 10% DMSO in holding medium، [HM (TCM-199 + 10% FBS) به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق قرار داده شدند. سپس به محلول انجمادی دوم(20% EG، 20% DMSO in HM) به مدت 25 ثانیه منتقل شده و بلافاصله به داخل نی های شیشه ای کشیده شدند. قسمت پر شده نی های شیشه ای به مدت 3 تا 5 ثانیه داخل نیتروژن مایع فرو برده شد و در ادامه به طور کامل به داخل نیتروژن مایع رها گردید. مرحله ذوب کردن نی های شیشه ای با قراردادن انتهای آنها در داخل 1 میلی لیتر از محلول سوکرز 25/0 مولار در محیط نگهداری (0.25M Sucrose in HM) انجام گرفت. پس از 1 دقیقه تخمک ها به داخل 100 میکرولیتر از محلول 15/0 مولار سوکرز در محیط نگهداری (0.15 M Sucrose in HM) انتقال یافتند. سپس با محیط نگهداری دو بار شستشو شدند. برای ارزیابی رشد، تخمک های ذوب شده به داخل قطرات 50 میکرولیتری از محیط بلوغ TCM-199 + 10% FBS + 10 IU/ml) (PMSG + 5 IU/ml HCG منتقل شده و زیر روغن پارافین در دمایoC5/38 داخل انکوباتور CO2 به مدت 24 ساعت کشت داده شدند. پس از ذوب نی های شیشه ای میزان بالایی از تخمک ها از لحاظ ظاهری طبیعی (90%) بودند. تعدادی از تخمک ها با استفاده از رنگ حیاتی تریپان بلو رنگ آمیزی شدند که درصد تخمک های زنده پس از 24 ساعت در گروه درمان 18/85% بود و از لحاظ آماری با گروه شاهد (90%) اختلاف معنی دار نداشت. همچنین، نسبت تخمک های بالغ شده بین دو گروه شاهد و درمان (به ترتیب، 29/61% در برابر 40%) اختلاف معنی دار نداشت. نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که میزان بقای تخمک های نابالغ گاو پس از انجماد شیشه ای در نی های شیشه ای و محلول EG + DMSO بالا است.