ساخت پلاسمید بیان کننده پروتئین نوترکیب تحت القای حرارتی در اشریشیاکلی

در بیان عامل تحریک کننده رده گرانولوسیت - ماکروفاژ انسانی (hGM-CSF)، در اشریشیاکلی تحت القای حرارتی، بر پایه پلاسمید pBC(SK)، که اختلاف آن ها در حضور یا عدم حضور توالی خاتمه دهنده نسخه برداری در پایین دست توالی کد کننده است پروتئین نوترکیب، ساخته شد.
دو پلاسمید بیان کننده حاوی یک قطعه 75 جفت بازی از پروموتور باکتریوفاژی? PL، یک ژن جهش یافته از رپرسور (CI857) CI، برای کنترل فعالیت پروموتور، که محصول آن حساس به حرارت است و یک ترادف نشانه PelB به منظور هدایت پروتئین نوترکیب به فضای پریپلاسمی است. توانایی پلاسمیدهای ساخته شده با بیان hGM-CSF تحت القای حرارتی در اشریشیاکلی آزمایش شده است.
نتایج حاصل از آنالیز پروتئین های باکتری های نوترکیب (TG1) حاوی هر یک از دو پلاسمید نوترکیب بعد از شوک حرارتی بر بیان و پردازش کامل GM-CSF انسانی نوترکیب در فضای پریپلاسمی کلون های به دست آمده دلالت دارد. با هدف افزایش کاربری پلاسمید حاوی خاتمه دهنده رونویسی برای بیان دیگر پروتئین های نوترکیب تحت القای حرارتی، توالی کلون سازی چندگانه ای (MCS) شامل یازده جایگاه برشی منحصر به فرد به این پلاسمید افزوده شد.
پلاسمیدهای ساخته شده در این تحقیق ابزارهای مناسبی را برای انجام مطالعات مربوط به بیان پروتئین های نوترکیب در اشریشیاکلی فراهم کرده اند.