بهینه سازی روش زنجیره ای پلی مرآز در تشخیص آلودگی آب به کلی فرم

چکیده: در تشخیص عوامل میکروبی با استفاده از روش های ملکولی، تخلیص کروموزوم مرحله بسیار مهمی است. در این تحقیق با افزایش مدت زمان مرحله دناتوراسیون بدون تخلیص کروموزوم باکتری، با تخریب سلول، تکثیر DNA انجام می شود.
مقمه: در این مطالعه تجربی، رقت های100/8، 100/4، 100/2، 100/1، 200/1، 400/1، 800/1 و 1600/1 از باکتری در آب مقطر تهیه گردید. پس از آن باکتری ها به روش فیلتراسیون از نمونه جدا گردید. بدون خالص سازی کروموزوم باکتری، با استفاده از روش زنجیره ای پلی مرآز و به کمک پرایمرهای طراحی شده، ژن 16sRNA تکثیر یافت. شناسایی آلودگی 15 حلقه چاه آب شهر اراک و مقایسه آن با روش MPN جهت بررسی حساسیت روش فوق انجام گرفت.
واکنش زنجیره ای پلی مرآز، آلودگی میکروبی آب، کلی فرم، تشخیص کشت رقت های تهیه شده نشان دهنده تایید تعداد باکتری ها در این رقت ها بود. نتیجه واکنش زنجیره ای پلی مرآز رقت ها (پس از فیلتراسیون) نشان داد که این سیستم قادر است وجود باکتری در این رقت ها را شناسایی کند. علاوه بر آن مقایسه تشخیص آلودگی آب به دو روش MPN وPCR انجام گرفته در این تحقیق، نشان دهنده حساسیت بالای روش اخیر بود.
نتایج به دست آمده از این بررسی حاکی از آن است که با روش مذکور علاوه بر این که امکان بروز نتیجه منفی کاذب کمتر می شود نیاز به انجام مراحل سخت، پیچیده و وقت گیر تخلیص کروموزم نیز نمی باشد.