به کارگیری روش Real Time RT-PCR با استفاده از رنگ سایبرگرین به منظور سنجش کمی ویروس نقص سیستم ایمنی انسانی نوع یک (HIV-1) و مقایسه نتایج به دست آمده با نتایج حاصل از روش کوباس آمپلی کور

در این تحقیق روش Real Time RT-PCRبا استفاده از رنگ سایبرگرین به منظور سنجش کمی ویروس نقص سیستم ایمنی انسانی نوع یک (HIV-1) راه اندازی شد. این آزمایش بر اساس تکثیر ناحیه ژن pol ویروس بوده و از دستگاه ترموسایکلرBI 7500 استفاده شد. 26 بیمار مبتلا به HIV-1 با این روش مطالعه شدند و سپس نتایج با آزمون تجارتی استاندارد کوباس آمپلی کور مونیتور تست (COBAS Amplicor HIV-1 Monitor Test)مقایسه شد. نتایج حاصل از این تحقیق نشان داد که این روش قادر به اندازه گیری حداقل 500 کپی از HIV-1 RNA در هر میلی لیتر است. علاوه بر این، آزمایش در محدوده 5-109×5 کپی از RNA ویروس در هر میکرولیتر خطی است. از آنجایی که در هیچ کدام از افراد کنترل هیچگونه علامت مثبتی نشان داده نشد، ویژگی این روش 100 درصد محاسبه شد. اندازه گیری کمی HIV-1 در بیماران با استفاده از روش راه اندازی شده و روش استاندارد نشان داد که همبستگی بسیار خوبی بین دو روش وجود دارد (95/0=R2). بر اساس آخرین اطلاعات موجود، شیوع HIV در جمهوری اسلامی ایران در یک وضعیت هشدار دهنده در حال افزایش است. از آنجایی که سطح پلاسمایی ویروس، موثرترین شاخص برای بررسی درمان بیماری است، اندازه گیری سطح پلاسمایی HIV-1 ابزار بسیار مهمی برای پیگیری فعالیت ویروس در افراد آلوده است. در این راستا راه اندازی و توسعه روش های اندازه گیری HIV-1 RNA ابزار منحصر به فردی است که به پزشک برای آگاهی از وضعیت درمان در بیمارانی که تحت درمان ضد رتروویروسی قرار گرفته اند کمک می کند. در این تحقیق روشSYBR-green Real Time RT-PCR را به منظور سنجش کمی HIV-1 در بیماران آلوده راه اندازی شد. از آنجایی که در این روش از RNA استاندارد سنتز شده استفاده شد، محدوده شناسایی بالادست در این روش بسیار بالاتر از روش استاندارد بود (109 ×5 در مقابل 105×5/7). بنابراین اگر نیازی به محدوده دینامیکی گسترده تری باشد- مانند موارد حاد بیماری- این استاندارد مفید خواهد بود. در این تحقیق تکرارپذیری در سطح درون سنجش (Intra assay) و بین سنجش (Inter assay) بررسی شد. ضریب تغییرات Ct به دست آمده در آزمون تکرارپذیری درون سنجش و بین سنجش به ترتیب کمتر از 3 و 5/4 درصد بود که نشان می دهد این روش تکرارپذیری بالایی دارد. با توجه به نتایج به دست آمده روش راه اندازی شده، می تواند جایگزین مناسبی برای روش استاندارد در سنجش کمی HIV-1 باشد.