بررسی روند تمایز سلول های استرومایی مغز استخوان به سلول های شبه عصبی و گلیالی در شرایط محیط کشت تحت اثر عوامل القایی مختلف

تمایز (BMSCs) Bone Marrow Stromal Cells به سلول های شبه نوروگلیال در محیط کشت تحت روش یا روش های معین در این تحقیق BMSCs از استخوان فمور وتیبیای موش صحرایی بالغ تهیه و پس از رسیدن به پاساژ چهارم، بنیادی بودن و خلوصشان با بیان مارکر استرومایی فیبرونکتین توسط روش ایمونوسایتوشیمی و همچنین Oct-4 توسط روشsemi-quantitative RT-PCR بررسی شد. ضمنا در این مرحله بیان آنتی بادی هایNestin، NF68، GFAP و O4 نیز ارزیابی شد.
سپس این سلول ها در دو مرحله پیش القا و القا به سلول های شبه Neuroepithelial، شبه نورونی و شبه گلیالی تمایز داده شدند. در مرحله پیشالقا با کاربرد یکی از محرک هایdimethylsulfoxide، (DMSO) beta-mercaptoethanol (BME) وbutylated hydroxyanisole (BHA) به طور مجزا و بدون حضور (FBS) fetalbovine serum و فقط در محیطalpha minimal essential medium (α-MEM) و سپس در مرحله القا از retinoic acid (RA) به همراه FBS 15 درصد استفاده شد. در بررسی میزان تمایز BMSCs پس از پایان چهار روز از مراحل القا از آنتی بادی های مذکور استفاده شد. همچنین بیان ژن NeuroD و Oct-4 در سطح mRNA بررسی شد.
سلول های BMSCs پس از پاساژ چهارم توانستند پروتئین Fibronectin را به میزان 86/3±75/92 درصد بیان کنند. در بررسی ایمونوسایتوشیمی در خصوص تمایز سلول ها مشخص شد که درصد ناچیزی به سلول های شبه Neuroepithelial و شبه نورونی تمایز یافته و تمایز به سلول های شبه آستروسایت و شبه الیگودندروسایت مشاهده نشد. همچنین در بررسی RT-PCR این سلول ها، mRNA ژن Oct-4 به خوبی بیان شد، در حالی که باند مشخصی در بیان mRNA ژن NeuroD در ژل الکتروفورز مشاهده نشد.
بیان قابل توجه مارکر Nestin و NF68 توسط القا کننده های DMSO و RAدر پایان مراحل پیش القا و القا توانست به طور معنی داری (P<0.05)، درصد سلول های شبه نورواپیتلیال (63/4±03/75) و شبه نورونی (62/5±75) بیشتری را نسبت به القا کننده های دیگر ایجاد کند درحالی که میزان تمایز به سلول های شبه آستروسایت و شبه الیگودندروسایت توسط القا کننده های فوق در این مرحله کمتر از 5 درصد بود. لازم به ذکر است از بین سلول های در معرض تمایز در هر سه گروه القا فقط 3 الی 6/6 درصد آنتی بادی Fibronectin را بیان کردند. همچنین فقط گروه DMSO-RA بیان mRNA ژن NeuroD را به خوبی نشان داد اما mRNA ژن Oct-4 در این مرحله در هیچ کدام از سه گروه القا کننده بیان نشد.
BMSCs تحت اثر القا کننده های DMSO و RA توانست به میزان قابل ملاحظه ای به سلول های شبه نورواپیتلیال و شبه نورونی متمایز شود در حالی که میزان تمایز به سلول های شبه گلیالی بسیار کم بود.