جداسازی و بررسی امتزاج پروتوپلاست های نارنگی ساتسوما (Citrus unshiu) و لیموآب شیراز (Citrus aurantifolia)

تولید دورگ های رویشی حاصل از امتزاج پروتوپلاست، به عنوان بخشی از برنامه های اصلاحی مرکبات در جهان است. در این بررسی از کشت پینه لیموآب شیراز و مزوفیل برگ دانهال نوسلاری نارنگی انشو در شرایط استریل جهت جداسازی پروتوپلاست استفاده شد. غلظت بهینه آنزیم برای جداسازی پروتوپلاست از برگ و پینه به ترتیب 2% سلولاز، 5/1 % پکتیناز و 5/0% سلولاز، 5/0% پکتیناز بود. با استفاده از مخلوط های آنزیمی بعد از 12 تا 14 ساعت از یک گرم سلول و برگ تازه به ترتیب 106 5/1-1 و107 1-8/0 پروتوپلاست آزاد شد. همچنین زیوایی پروتوپلاست های حاصل از برگ و سلول بوسیله رنگ آمیزی با فلورسئین دی استات (FDA) به ترتیب 70 و 80% تعیین شد. پروتوپلاست ها با روش شیمیایی و با استفاده از پلی اتیلن گلیکول (PEG) امتزاج داده شدند. فشار اسمزی بهینه برای هر دو والد با محلول شستشوی سلول و پروتوپلاست (CPW) دارای 13% مانیتول بدست آمد.