ارزیابی شرایط آزمایشگاهی مناسب جهت مطالعه کینتیکی آنزیم کراتین کیناز استخراج شده از اسپرم انسان

کراتین کیناز آنزیمی است که واکنش برگشت پذیر انتقال فسفات از ATP به کراتین را کاتالیز می نماید، که نتیجه آن ترکیب پر انرژی فسفوکراتین (فسفاژن) خواهد بود. فسفوکراتین نقش مهمی در تامین نیروی مورد نیاز اسپرم جهت حرکت ایفا می نماید؛ بنابراین عملکرد صحیح کراتین کیناز، عامل مهمی در تامین انرژی مورد نیاز حرکت اسپرم خواهد بود. بر این اساس در این مطالعه شرایط آزمایشگاهی مناسب جهت مطالعات کینتیکی این آنزیم، پس از استخراج از اسپرم مورد بررسی قرار خواهد گرفت.
آنزیم کراتین کیناز طی مراحل مختلف شستشو، سانتریفیوژ و کروماتوگرافی روی ستون DEAE-32 از حدود 30 میلی لیتر مایع منی به دست آمده از 10 مرد سالم با میانگین سنی30 سال جدا گردید. در هر مرحله از این جداسازی میزان پروتئین به روش برادفورد و فعالیت کراتین کیناز به شیوه Rosolki مورد سنجش قرار گرفت.
نتایج این مطالعه نشان داد که فعالیت کراتین کیناز اسپرم انسان با افزایش غلظت کراتین فسفات از 5/0 تا 10 میلی مولار حدود 67 درصد افزایش می یابد. به علاوه تغییر pH از 6 تا 8/6 نیز افزایشی در فعالیت این آنزیم نشان داد. در پایان مطالعه اثر دماهای مختلف (20 تا 50 درجه سانتی گراد) بر فعالیت کراتین کیناز اسپرم انسان یک افزایش فعالیت در 20 تا 40 درجه سانتی گراد، برای این آنزیم نشان داد.
بهترین غلظت سوبسترا، دما و PH برای مطالعات آزمایشگاهی بررسی فعالیت کراتین کیناز به دست آمده از اسپرم انسان، به ترتیب برابر با 3 میلی مولار، 40 درجه سانتی گراد و 8/6 می باشد.