تعیین پروتئازهای سلولهای کشت داده شده روده میانی کنه هیالوما آناتولیکوم آناتولیکوم

آنزیمها دارای نقش کلیدی در هضم پروتئینها در کنه ها و سایر حشرات خونخوار هستند با آگاهی از نحوه هضم خون در دستگاه گوارش کنه درک قوانین اساسی مربوط به کنترل کنه ها نیز آسانتر خواهد بود. سلولهای میانی روده کنه با پدیده آندوسیتوز اجزای خون را به درون خود وارد می کنند. برداشت پروتئین های خون توسط سلولهای روده میانی کنه ها بیانگر این واقعیت است که پروتئازها در سلولهای روده میانی کنه ها وجود دارند. در این مطالعه روده میانی کنه های پرورش یافته کاملا از خون خورده شده پاک شد. بافت روده میانی عاری از خون در PBS استریل دارای آنتی بیوتیک غوطه ور شد. سپس این بافت با استفاده از کولاژناز تبدیل به سلولهای جدا از هم شد و با استفاده از سانتریفوژ جمع آوری و در محیط کشت اختصاصی کشت داده شدند. بعد از دو روز عصاره سلولی از سلولهای روده میانی کشت داده شده بدست آمد. سپس سلولها در یک محلول هیپوتونیک غوطه ور و سانتریفوژ شده و مایع رویی از توده غشاء سلولی جدا شد. پروتئین های غشاء سلولی به کمک محلول 2% تریتون 100 X استخراج شد. آزمایش پروتئازها با سوبستراهای اختصاصی برای پروتئینهای سیتوپلاسمی و پروتئینهای متصل به غشاء انجام و مورد بررسی قرار گرفت. این مطالعات چنین نشان داد که آنزیم شبه تریپسین یک پروتئین متصل به غشاء است ولی، کربوکسی پپتیداز B، کاتیپسین C، کاتیپسین B و کاتیپسین D در سیتوپلاسم سلولهای روده میانی روده کنه وجود دارند. هیچ نوع آنزیم شبه کیموتریپسین در سلولهای روده میانی کنه وجود ندارد.