بهینه سازی بیان ژن و تخلیص پروتئین نوترکیب LTB باکتری اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک و تولید آنتی بادی علیه آن

70-30% موارد اسهال ناشی از عفونت های باکتریایی است. شایع ترین باکتری به دست آمده، اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک یا ETEC است. امکان به وجود آمدن ایمنی حفاظتی علیه این بیماری وجود دارد و طراحی واکسن آن از اهداف سازمان جهانی بهداشت است. بیشتر سویه های این باکتری، مولد توکسین حساس به حرارت هستند. لذا زیرواحد B توکسین حساس به حرارت، برای تولید واکسن مطرح است. هدف مطالعه حاضر، بهینه سازی بیان ژن زیرواحد B توکسین حساس به حرارت به منظور بررسی ایمنی زایی بود.
بهینه سازی بیان ژن زیرواحد B توکسین حساس به حرارت در مورد متغیرهای زمان، دما و غلظت IPTG انجام شد. پس از بیان، پروتئین مورد نظر از طریق ستون تمایلی نیکل تخلیص شد. برای تولید آنتی بادی، پروتئین زیرواحد B توکسین حساس به حرارت به صورت زیر جلدی در چهار نوبت به همراه ادجوان به موش ها تزریق شد. در فواصل تزریقات و پس از آخرین تزریق، از موش ها خونگیری به عمل آمد و واکنش الایزا انجام شد.
پس از بهینه سازی بیان، بهترین بیان پروتئین در زمان 3 ساعت، دمای 37 درجه سانتیگراد و غلظت 1 میلی مولار IPTG صورت گرفت. با استفاده از ستون نیکل، پروتئین با خلوص بیش از 95% تخلیص شد. واکنش الایزا نیز نشان دهنده تولید بالای آنتی بادی علیه این پروتئین در موش ها بود.
پروتئین زیرواحد B توکسین حساس به حرارت می تواند به عنوان مولکول ایمونوژن، یکی از اجزای مهم در تولید واکسن علیه ETEC باشد.