بیان توالی بهینه شده ژن زیرواحد اصلی فاکتور کلونیزاسیون I اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک (ETEC)

اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک به عنوان مهم ترین عامل اسهال و مرگ و میر در کودکان در کشورهای در حال توسعه شناخته شده است. این باکتری سالانه موجب مرگ 300 تا 500 هزار کودک زیر 5 سال می شود. به دلیل درمان مشکل و شیوع زیاد آن، طراحی یک واکسن موثر علیه این ارگانیسم از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. پروتئین CfaB به عنوان زیرواحد اصلی فیمبریه، نقش مهمی در اتصال باکتری به سلول های پوششی روده دارد و آنتی بادی های تولید شده علیه این پروتئین می تواند از اتصال باکتری به سطح بافت پوششی جلوگیری کند. از این رو این مولکول به تنهایی یا با سایر عوامل حدت زا در طراحی واکسن علیه این ارگانیسم مورد توجه بسیاری از محققین است. در این مطالعه، بیان فاکتور کلونیزاسیون B با هدف مطالعه ایمونوژنیسیته این پروتئین به عنوان جزئی از کاندیدای واکسن انجام شد.

ژن cfaB با روش PCR، تکثیر و در ناقل pET28a همسانه سازی و بیان آن بررسی شد. با توجه به عدم بیان این ژن به علت وجود کدون های نادر، ژن cfaB با استفاده از کدون های متداول در اشریشیا کولی بهینه سازی و مجددا در ناقل pET28a همسانه سازی و بیان شد.

حضور باند 20 کیلودالتونی در ژل SDS-PAGE، بیان پروتئین CfaB را نشان می داد که با روش ایمنو بلات با آنتی بادی anti-His tag و آنتی بادی ضد CfaB، تایید و با ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص شد.

بهینه سازی کدون و بیان در میزبان های هترولوگ یک روش مفید در تولید پروتئین های نوترکیب به مقدار زیاد است.