ارزیابی حساسیت سه پرایمر مختلف با استفاده از روش RFLP -PCR برای تمایز مولکولی مایکوباکتریوم های آتیپیک

با افزایش عفونت های ناشی از مایکوباکتریوم های آتیپیک (Non- tuberculosis mycobacterium; NTM) در سال های اخیر، تشخیص سریع این دسته از اهمیت ویژه ای برخوردار است. از آنجایی که روش های فنوتیپی وقت گیر و پرهزینه هستند، امروزه از روش های مولکولی به طور وسیعی برای شناسایی و تمایز گونه های مختلف مایکوباکتریوم ها استفاده می شود. هدف ازاین مطالعه، تمایز مولکولی مایکوباکتریوم های آتیپیک با استفاده از سه پرایمر TB و 16S-23S rRNA gene spacer و hsp65 در روش RFLP -PCR و ارزیابی حساسیت این پرایمرها است. بررسی روی 48 نمونه مایکوباکتریوم آتیپیک جدا شده از بیماران مبتلا به سل ریوی که توسط تست های فنوتیپی شناسایی شده بودند، صورت گرفت. حساسیت دارویی با روش نسبی (Proportional method) انجام و قطعاتی از ژنهای hsp65، 16S-23S rRNA gene spacer توسط PCR تکثیریافت. سپس قطعات تکثیر یافته توسط آنزیم های AVaII، HpaII، HphI، HaeIII، BsteII هضم و الگوی بدست آمده روی آگارز 2% بررسی شد. روش hsp65 PCR- RFLP از حساسیت و دقت بالایی برای تمایز گونه های مختلف مایکوباکتریوم های غیر توبرکلوزیس برخوردار است. از مجموع 48 نمونه، 8 نمونه (6/16%) MDR (مقاوم به چند دارو)، 4 نمونه (3/8%) حساس و 36 نمونه (75%) غیرMDR (مقاوم به یک دارو) بود. 13 نمونه (27%) تند رشد و سایر نمونه ها (73%) کند رشد بود. سرعت تشخیص پرایمر hsp65 در روش PCR- RFLP، در بسیاری از گونه ها بالاتر از بقیه پرایمر ها گزارش شد.