بیان پروتئین پوششی و پروتئین غیر ساختمانی NS4 ویروس نوارک ایرانی گندم در باکتری Escherichia coli

ویروس نوارک ایرانی گندم (Iranian wheat stripe virus، IWSV) عضو غیر قطعی جنس Tenuivirus است. از مهمترین پروتئین های کد شونده توسط تنوئی ویروس ها، پروتئین پوششی (CP) و پروتئین عمده غیرساختمانی (NS4) می باشند و آنتی بادی های تهیه شده بر علیه آنها می توانند برای ردیابی ویروس در طبیعت و بررسی وظایف این ژن ها مورد استفاده قرار گیرند. تهیه آموده خالص این پروتئین ها از گیاه مبتلا اغلب با اشکال روبرو است. در این مطالعه به منظور بیان ژن های cp و ns4 ویروس فوق، هر کدام از این دو ژن با استفاده از آغازگرهای اختصاصی تکثیر و پس از همسانه سازی به ناقل pET 28a انتقال داده شد. پلاسمیدهای نوترکیب در تراریختی باکتری E. coli سویه BL21(DE3) استفاده گردید و سلول های باکتری نوترکیب در محیط کشت حاوی IPTG جهت القاء بیان ژن های هدف کشت شدند. پس از القای بیان، پروتئین های سنتز شده به منظور شناسائی، استخراج شدند. نتایج حاصل از الکتروفورز SDS-PAGE دو نوار را با وزن مولکولی 9/40 و 23 کیلودالتون نشان داد که منطبق با وزن مولکولی محصولات بالقوه ای است که توسط دو ژن مزبور در دیگر تنوئی ویروس ها تولید می شوند. تجزیه وسترن بلات بیان پروتئین های CP و NS4 را با استفاده از آنتی بادی پلی کلونال اختصاصی تائید نمود. چنین پروتئین هائی در مقیاس وسیع و با خلوص زیاد می توانند در سیستم میکروبی تولید شوند و برای تهیه آنتی بادی های اختصاصی مورد استفاده قرار گیرند.