ساخت ناقل یوکاریوتی دو سیسترونی بیان کننده ژن های M1 و نوکلئوپروتئین ویروس آنفلوانزا

در این پژوهش در راستای راه اندازی یک واکسن جامع براساس واکسن ژنی، دو ژن محافظت شده در سویه ها و زیرگونه های مختلف ویروس آنفلوانزا (M1 و نوکلئوپروتئین) در ناقل دوسیسترونی یوکاریوتی بیان شد.
پلاسمیدهای M1-pIRES2-EGFP و pIRES2-NP به ترتیب با کلون کردن محصولات PCR ژن های M1 و نوکلئوپروتئین برگرفته از ویروس آنفلوانزا H1N1 سویه A/Peurto Rico/8/34 در داخل ناقل بیانی pIRES2-EGFP ساخته شد. به منظور ساخت پلاسمید دو سیسترونی M1-pIRES2-NP، ژن M1 از پلاسمید M1-pIRES2-EGFP استخراج و در پلاسمید pIRES2-NP ساب کلون شد. در نهایت بررسی بیان این دو پروتئین در سلول های یوکاریوتی با ترانسفکشن کلون ساخته شده به داخل سلول BHK-21 با استفاده از ایمونوفلوئورسنس غیر مستقیم انجام شد.
موفقیت در کلونینگ صحیح ژن های مذکور با هضم آنزیمی و تعیین توالی قطعات کلون شده به اثبات رسید. بیان صحیح این دو ژن در سلول های یوکاریوتی با ترانسفکشن این کلون در رده سلولی BHK-21 و بررسی با روش ایمونو فلورسنس به اثبات رسید.
بیان همزمان دو ژن M1 و نوکلئوپروتیئن ویروس آنفلوانزا در یک سازه ژنی با واسطه توالی IRES ممکن است.