ساب کلونینگ ژن زیر واحد آلفای هورمون های گلیکوپروتئینی بخش پیشین غده هیپوفیز در یک وکتور بیانی سلول های پستان داران

هورمون های گلیکوپروتئینی مترشحه از هیپوفیز قدامی شامل هورمون های گلیکوپروتئینی انسانی شامل هورمون محرک تیروئید، هورمون لوتئینیزه کننده، هومون محرک فولیکولی و گونادوتروپین کوریونی هستند که هر یک از دو زیر واحد آلفا و بتا تشکیل شده است. زیر واحد آلفا در همه هورمون های فوق مشابه است و از چهار اگزون و سه اینترون تشکیل شده است. زیر واحد بتا مسئول فعالیت اختصاصی هر یک از این هورمون ها است. هدف این مطالعه کلونینگ cDNA زنجیره آلفای هورمون های گلیکوپروتئینی در وکتور مناسب برای سیستم یوکاریوتی بود.
به منظور کلونینگ cDNA زیر واحد آلفا هورمون های گلیکوپروتئینی از T-vector واجد ژن آلفا، به کمک یک جفت پرایمر، cDNA مجددا آمپلیفیه گردید و در سایت های Bam HI و Not I پلاسمید pcDNA3.1 کلون گردید. پلاسمید نوترکیب به سلول E.coli Top10F ترانسفورم شد و کلونی های واجد پلاسمید به وسیله Colony PCR انتخاب شدند. صحت پلاسمید تخلیص شده از این کلون ها ابتدا توسط هضم آنزیمی و نهایتا به روش سکانسینگ بررسی شد.
آنالیز آنزیمی و سکانسینگ نشان داد که پلاسمید pcDNA3.1-F351 α دارای توالی پلاسمیدی صحیح می باشد و تطابق کامل با ژن آلفای هورمون های گلیکوپروتئینی گزارش شده در GenBank دارد.
این پلاسمید به دلیل ساختار صحیح جهت انتقال به سیستم یوکاریوتی و ارزیابی بیان مناسب می باشد.