فهرست مطالب

Cell Journal - Volume:6 Issue: 2, 2004

Cell Journal (Yakhteh)
Volume:6 Issue: 2, 2004

  • تاریخ انتشار: 1383/06/01
  • تعداد عناوین: 8
|
  • محمد شعبانی، صالح زاهدی اصل*، هما شاردی مناهجی صفحات 65-68
    هدف

    بررسی اثر مصرف طولانی مدت وراپامیل با دوزهای مختلف روی عناصر خونی در موش صحرایی نر

    مواد و روش ها

    این تحقیق بر روی موش های صحرایی نر که مدت دو ماه دوزهای 10، 20 و 50 میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن، وراپامیل را به صورت خوراکی دریافت کردند، انجام شد. شمارش گلبولهای خونی توسط لام نئوبار و میکروسکوپ نوری انجام شد و برای رنگ آمیزی جهت تعین درصد انواع گلبولهای سفید از محلول گیمسا استفاده شد.

    یافته ها

    در شمارش گلبولهای سفید و قرمز تغییرات معنی داری نسبت به گروه کنترل مشاهده نشد. درصد لنفوسیتهای در گردش در گروه 20 و 50 نسبت به گروه شم و کنترل کاهش معنی دار و درصد منوسیتهای در گردش در گروه 10، 20 و 50 نسبت به گروه شم و کنترل افزایش معنی داری(p<0.05) نشان داد. درصد نوتروفیلها، ایوزینوفیلها و بازوفیلهای در گردش بین گروه های مختلف تفاوت معنی داری نشان نداد.

    نتیجه گیری

    نتایج حاصل به خصوص کاهش درصد لنفوسیتها در دوزهای متوسط و بالای وراپامیل اثر احتمالی وراپامیل در تضعیف سیستم ایمنی را تایید می کند که توجه به این مساله را در بیمارانی که از وراپامیل به مدت طولانی استفاده می کنند مطرح می نماید.

    کلیدواژگان: وراپامیل، گلبولهای سفید، گلبولهای قرمز، لنفوسیت
  • مینا رمضانی *، مجتبی رضازاده ولوجردی، کاظم پریور صفحات 69-74
    هدف

    مقایسه اثرات سه روش مختلف انجماد شیشه ای [Closed pulled straw (CPS)، Open pulled straw (OPS)، Conventional(C)] بر بقا مورفولوژیکی جنینهای دو سلولی موش و تکوین آنها به بلاستوسیستهایHatched

    مواد و روش ها

    جنینهای دو سلولی موش به چهار گروه کنترل (194)، (160) C، (150) OPS، (155) CPS تقسیم شدند. جنینهای گروه کنترل در محیطHTF به مدت 120-96 ساعت کشت داده شدند. در گروه های انجمادی جنینها با اتیلن گلیکول 5.5 مولار و یک مول سوکروز با سه روش مختلف منجمد و پس از ذوب سریع در دمای اطاق، جنینها در محلولهای سوکروز (0.5، 0.25 و 0.125 مولار) به صورت مرحله به مرحله آبدهی شدند و پس از سه بار شستشو در محیط HTF کشت داده شدند. پس از ذوب، جنینهای زنده در هر روش تعیین شدد. توانایی جنینهای زنده برای ادامه تکوین براساس کشت In vitro آنها مشخص و با گروه کنترل مقایسه شد. در تمامی موارد از آزمون آماری X2 استفاده شد.

    یافته ها

    میزان بقا جنینها پس از ذوب به طور معنی داری در 76 CPS درصد بیشتر از P<0.01) OPS، 62 درصد) وP<0.05) C، 66 درصد) بود.میزان بلاستوسیستهای hatched در 58) C درصد) و 64) CPS درصد) اختلاف معنی داری نداشت. اما به طور معنی دار کمتر از کنترل (72درصد) در گروه های (P<0.05) C و (P<0.01) OPS بود.

    نتیجه گیری

    نتایج این مطالعه حاکی از آن است که روش CPS احتمالا راه مفیدتری برای انجماد جنینهای دو سلولی موش است.

    کلیدواژگان: انجماد شیشه ای، نی کشیده شده باز (OPS)، نی کشیده شده بسته (CPS)
  • کاظم احمدی*، قاسم سلگی صفحات 75-80
    هدف

    بررسی اثر 17- بتااسترادیول و 5- آلفا دی هیدروتستوسترون بر ترشح نیتریک اکساید توسط ماکروفاژهای ریوی تحریک شده با TGF-b

    مواد و روش ها

    ماکروفاژهای ریوی با روش لاواژ ریه از رت های نر سالم با سن 8-10 هفته به دست آمد. ماکروفاژهای ریوی به تعداد 1 105 در یک میلی لیتر محیط کشت 1640 RPMIبدون فنل رد حاوی 10درصد FCS به هر چاهک پلیت 24 خانه اضافه و به مدت 2 ساعت در انکوباتور 37 درجه سانتی گراد حاوی 5درصد CO2 انکوبه شدند. پس از مدت مذکور، سلولهای غیر چسبیده (غیر ماکروفاژ) با سه بار شستشو خارج و مجددا یک میلی لیتر محیط کشت کامل بدون فنل رد، حاوی LPS 10? g/ml و IFN-? 100 u/mlو غلظتهای مختلف هورمونهای 17- بتا استرادیول و یا مدت 24 ساعت دیگر ادامه یافت. سپس مایع رویی را برداشته و پس از سانتریفوژ، مقدار نیتریت موجود در محلول رویی به عنوان اندیکاتوری از نیتریک اکساید به روش گریس اندازه گیری شد.

    یافته ها

    نتایج نشان داد که ترشح نیتریک اکساید در پاسخ به 5- آلفا دی هیدروتستوسترون و در حضور TGF-? کاهش یافته و حداقل و حداکثر کاهش به ترتیب در پاسخ به 1×10-10 و 1×10-6 مولار به دست آمد. همچنین نتایج نشان داد که این اثر کاهشی TGF-? بر ترشح نیتریک اکساید در پاسخ به هورمون 17- بتا استرادیول بیشتر نمایان بوده به طوری که حداقل 34.52درصد و حداکثر 68.57 درصد به ترتیب در پاسخ به 1×10-11 و 1×10-6 مولار به دست آمد.

    نتیجه گیری

    به نظر می رسد که قسمتی از روند التهاب ریوی که وابسته به TGF-? است احتمالا از طریق نیتریک اکساید اعمال شده و هورمونهای جنسی نیز می تواند در این حالت دخیل باشند.

    کلیدواژگان: ماکروفاژهای ریوی، نیتریک اکساید، 17، بتااستردیول، 5، آلفا دی هیدروتستوسترون
  • رضا شاپوری*، مرتضی ستاری، زهیر محمدحسن صفحات 81-84
    هدف

    بررسی عصاره کلروفرمی سیر بر روی بروسلا در داخل ماکروفاژ

    مواد و روش ها

    در این بررسی عصاره کلروفرمی سیر استخراج و مقدار آلیسین به روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا تعیین شد. سپس اثر آن بر بقای درون ماکروفاژی بروسلا ملی تنسیس 1 Rev و بروسلا آبورتوس 19 S در کشت سلولی تهیه شده از ماکروفاژهای صفاقی موش مطالعه شد.

    یافته ها

    نتایج نشان داد که عصاره در رقتهای 1:40 برابر با غلظت 439 میکرو گرم بر میلی لیتر آلیسین، 1:80 برابر با 218 میکروگرم بر میلی لیتر آلیسین و 1:160 برابر با 128 میکروگرم بر میلی لیتر آلیسین، باعث حذف بروسلاهای داخل ماکروفاژی پس از 24 ساعت می شود.

    نتیجه گیری

    با توجه به اثرات ضد میکروبی سیر بر روی بروسلای درون ماکروفاژی لزوم استفاده از سیر و ترکیبات آن در درمان بروسلوز حداقل در کنار شیمی درمانی نمایان می شود.

    کلیدواژگان: بروسلا، ماکروفاژ، آلیسین، مواد ضد میکروبی، سیر
  • مجتبی عمادی بایگی، سید جواد مولا*، پروانه نیک پور، تقی الطریحی صفحات 85-90
    هدف

    بررسی بیان متمایز واریانتهای مختلف ژن survivin در طی تکوین جنینی و پس از تولد در مغز موش

    مواد و روش ها

    از 27 سر موش نژاد NMRI در 9 گروه سنی مختلف (تعداد 3 سر در هر گروه) شامل: جنینهای 11 و17 روزه و موش های تازه متولد شده تا یک ماهه، به فاصله هر پنج روز، نمونه گیری به عمل آمد RNAی کل از هر مغز استخراج شد و واکنش رونویسی معکوس با استفاده از پرایمر الیگو dT و آنزیم M-MLV انجام شد cDNA ی حاصل با پرایمرهای اختصاصی برای survivin و بتا 2- میکروگلوبولین (به عنوان کنترل داخلی)، طی واکنش زنجیره ای پلیمراز تزاید یافت.

    یافته ها

    نتایج این تحقیق نشان می دهد که survivin در طی تکوین جنینی و پس از تولد در مغز موش بیان می شود. واکنش RT-PCR در مورد survivin، دو محصول تزاید یافته را با شدت های مختلف نشان داد. میزان بیان واریانت بزرگتر surviving 140)) در قبل و هنگام تولد به طور معنی داری بیشتر از بیان آن در طی تکوین پس از تولد است.

    نتیجه گیری

    نتایج بیانگر آن است که بیان 140 survivin در طی تکوین مغز تحت کنترل است. این کنترل، احتمالا در هموستاز بافت مغز و تکوین سیناپس ها نقش دارد.

    کلیدواژگان: آپوپتوز، مغز، تکوین، RT-PCR، Survivin
  • نادره نادری، علی اکبر پورفتح الله، کامران علی مقدم، اردشیر قوام زاده، محمد موذنی صفحات 91-96
    هدف

    جدا سازی سلولهای دندریتیک (DCs) خون محیطی به صورت دست نخورده (Intact Peripheral Blood Dendritic Cells) با استفاده از روش انتخاب منفی (Negative Selection) به کمک روش روزت و Immunomagnetic depletion

    مواد و روش ها

    در ابتدا سلولهای تک هسته ای خون محیطی با استفاده از فایکول جدا شده و لنفوسیتهای T با اتصال به گلبولهای قرمز گوسفند تیمار شده با AET حذف گردیدند. سلولهای دارای شاخص های رده ایی (Lineage Marker) با استفاده آنتی بادی های مونوکلونال (mAbs) اختصاصی ضد شاخص های رده ایی CD3، CD11b، CD14، CD16، CD19، CD56 و بیدهای مغناطیسی واجد anti-mouse IgG از سلولهای باقیمانده خارج شدند. درصد خلوص سلولهای دندریتیک به دست آمده با دو خصوصیت عدم حضور شاخص های رده ایی و حضور آنتی ژن HLA-DR، با استفاده از دستگاه فلوسایتومتر اندازه گیری شد.

    نتایج

    نتایج به دست آمده از بررسی های فلوسیتو متری نشان می دهد که جمعیت قابل توجهی (5/4درصد±5/58درصد) از سلولهای جدا شده قادر به واکنش با mAbهای ضد شاخصهای رده ایی نیستند ولی آنتی ژن HLA-DR را ابراز می کنند.

    نتیجه گیری

    روش Immunomagnetic depletion روشی جدید برای جداسازی DCs است که برخلاف روش های کلاسیک مطرح، قادر به جداسازی DCs به صورت دست نخورده است. این تحقیق، نخستین تحقیق در این زمینه در کشور است و میزان خلوص DCs به دست آمده در این بررسی مشابه مطالعات خارجی است. غنی سازی بالای DCs دست نخورده، راه مطالعه در مورد عملکردطبیعی DCs در زمینه های مختلف اتوایمنی، سرطان ها و بیماری های عفونی را هموار می نماید.

    کلیدواژگان: سلولهای دندریتیک خون محیطی، انتخاب منفی، بید مغناطیسی متصل به آنتی بادی
  • مینو سیاری، علی اکبر پورفتح الله*، کامران علی مقدم، مسعود سلیمانی صفحات 97-102
    هدف

    بررسی اثرتحریک خونسازی یا عدم تحریک خونسازی سیکلوسپورین A همراه با فاکتورهای رشد خونسازی IL-3،IL-6،SCF برروی فاکتورهای رشد خونساز مغزاستخوان انسان و ابعاد یک محیط کشت مناسب جهت نگهداری و تکثیر سلولهای خونساز مغز استخوان

    مواد و روش ها

    جمعیت مورد مطالعه را به طور تصادفی از داوطلبان سالم دهنده مغزاستخوان در گروه سنی 33-5 سال درمرکز تحقیقات پیوند مغزاستخوان بیمارستان شریعتی انتخاب گردید، کشت طولانی مدت مغزاستخوان در محیط IMDM (Iscovs Modified Dulbiccos Medium) به مدت 4 هفته و کشت کلونال سلولهای مغزاستخوان در محیط نیمه جامد آگار به مدت 14 روز صورت گرفت، سپس شمارش سلولی توسط میکروسکوپ معمولی و شمارش کلنی سلولهای خونساز توسط میکروسکوپ معکوس (Invert) انجام شد و جهت مشاهده مورفولوژی سلولهای خونساز توسط سایتواسپین لام تهیه و رنگ آمیزی گردید.

    یافته ها

    در این مطالعه افزایش سلولهای تشکیل دهنده کلنی خونساز در محیط کشت حاوی سیکلوسپورین CyA (A)، اینترلوکین(IL-3) 3، اینترلوکین (IL-6) 6 و فاکتور استم سل(SCF) در مقایسه با محیط کشت بدون فاکتور رشد وCyA، محیط کشت حاویCyA و محیط کشت حاویIL-3، IL-6، SCF مشاهده شد. باتوجه به نتایج بدست آمده افزایش سلولهای غیرچسبان در محیط حاوی IL-3، IL-6، SCF، CyA با میانگین (101.15) نسبت به محیط حاوی IL-3، IL-6، SCF با میانگین(82.8) و محیط حاوی CyA با میانگین (71.45) است. در محیط کشت کلونال افزایش تعداد سلولهای تشکیل دهنده کلنی مربوط به اثر تحریک کنندگی فاکتورهای رشد خونساز و سیکلوسپورین A با میانگین (56) نسبت به محیط کشت حاوی فاکتور رشد IL-3، IL-6، SCF با میانگین (32.65) و محیط کشت حاوی CyA با میانگین (45.05) مشاهده شد. همچنین افزایش کلنی خونساز در محیط PHA-Inactive با میانگین (31.37) نسبت به محیط PHA-Active با میانگین (25) نشان دهنده کاهش فعالیت فاکتورهای ممانعت کننده رشد در محیط PHA-Inactive است. در این مطالعه برای بررسی اثر تحریک کنندگی CyA و فاکتورهای رشد خونساز بر روی سلولهای خونساز مغزاستخوان در کشتLTBMC و افزایش کلنی سلولهای خونساز از طریق آزمون مستقل Student - t - test با (P<0.05) به عنوان سطح معنی داری استفاده شد.

    نتیجه گیری

    با توجه به نتایج بدست آمده لازم است تحقیقات گسترده ای در مورد اثرسیکلوسپورین A و فاکتورهای رشد خونساز بر روی مسیر های نسخه برداری و ارسال پیام جهت حیات و تکثیر سلولهای خونساز صورت بگیرد.

    کلیدواژگان: فاکتورهای رشد، کشت طولانی مدت مغز استخوان، سیکلوسپورین A
  • محمدحسین بهاروند*، مریم حاتمی، نرگس زارع صفحات 103-109
    هدف

    ارزیابی اثر فاکتور القایی رتینوییک اسید (RA) بر تمایز پیش سازهای عصبی با منشا بن یاخته های جنینی انسان در نواحی دارای مورفولوژی روزت (Rosette) و فاقد مورفولوژی روزت.

    مواد و روش ها

    از کلونی های سلولهای بنیادی جنینی انسان رویان H1برای تولید سلولهای عصبی انسانی استفاده شد. بدین منظور نواحی دارای مورفولوژی روزت و بدون مورفولوژی روزت برش زده شد و از قطعات حاصل، اجسام شبه جنینی (Embryoid bodies) ساخته شد و به دنبال آن این اجسام به مدت 20 روز تحت تیمار رتینوئیک اسید (10-6M) (RA) قرارگرفته و به دنبال آن، اجسام شبه جنینی به صورت منفرد به محیط کشت neurobasal حاوی2 درصد B27 و 10 درصد سرم جنینی گاو منتقل شده و به سلولهای عصبی و تمایز یافتند. به منظور ارزیابی نورونهای تولید شده در محیط آزمایشگاه به غیر از مورفولوژی از آزمونهای ایمونوسیتوشیمی استفاده شد.

    یافته ها

    مطالعات ایمونوسیتوشیمی با آنتی بادی علیه (Microtubule Associated protein -2) و Tubulin III و (Neurofilament protein) NF و (Neuron specific enolase) NSE و سیناپتوفیزین (Synaptophysin) نشان داد که سلولهای حاصل نورون هستند. همچنین به کارگیری RA در گروه دارای مورفولوژی روزت و بدون روزت موجب افزایش معنی دار اجسام شبه جنینی دارای سلول عصبی شد (مورفولوژی روزت: 2/73 در مقابل 2/13 درصد (P<0.01) و بدون روزت: 57.5 در مقابل 19.5 درصد (P<0.01) از طرفی نواحی دارای روزت در مقایسه با نواحی بدون روزت در نورون زایی پاسخ بیشتری در تیمار با رتینوییک اسید داشتند.

    نتیجه گیری

    این نتایج نشان می دهد RA نورون زایی را در بن یاخته های جنینی انسان القا نموده و ساختارهای Rosette در این سلولها از پتانسیل بالایی به منظور نورون زایی برخوردار می باشند و این امکان وجود دارد که بتوان از این سلولها در طب پیوند به منظور درمان بیماری های عصبی در آینده بهره جست.

    کلیدواژگان: بن یاخته های جنینی انسان، روزت، تمایز، نورون
|
  • Shabani M, Zahedi asl S*, Manaheji H Pages 65-68
    Introduction

    Verapamil, a phenylalkylamin –type ca 2+ channel blocker, is widely used in the treatment of cardiovascular diseases .

    Material and Methods

    In this study , the chronic effects of oral administration of the drug on hematologi and immunologic parameters of male Wistar rats have been studied. Verapamil was administered orally at dosages of 10,20,50 mg/kg for two months, while control rats received only distilled water. We studied leukocyte and erythrocyte counts by use of light microscopy.

    Results

    The lymphocyte counts were decreased (%10) in rats treated with 20,50 mg/kg of verapamil compared to control group. The monocyte counts were signifigantly increased (%5-8) at the end of treatment in the verapamil group. There were no significant differences in the body weight, total white and red blood cell counts ,and neutrophil count compared to control group.

    Conclusion

    These results should be taken into consideration in the chronic treatment of patients with verapamil and they suggest that immune parameters of such patients should be monitored during the treatment course.

  • Ramezani M*, Rezazadeh Valojerdi M., Parivar K Pages 69-74
    Introduction

    This Study was designed to compare the effects of three vitrification procedures [conventional (C), open pulled straw (OPS) and closed pulled straw (CPS)] on morphological survival of two-cell mouse embryos and their subsequent development to hatched blastocysts.

    Material and Methods

    Two-cell mouse embryos were divided into four groups, control (194), OPS (150), CPS (155) and C (160). The control embryos were cultured in HTF, for 96-120hrs. Embryos in vitrification group were vitrified with 5.5M EG and 1M sucrose by three different methods. After rapidly thawing at room temperature, embryos were diluted in stepwise sucrose solution (0.5, 0.25 and 0.125). The embryos were rinsed 3 times in HTF methods, then cultured. Survival of embryos in each procedure was determined after thawing. Ability of the survived embryos to continue development was assessed upon subsequent culture in vitro and compared with control group. All of the results were analyzed by chi-square test.

    Results

    The survival rate of the embryos after thawing was significantly higher in CPS (76%) compared to OPS(62%) (P<0.01) and C(66%), (P<0.05). The rate of hatched blastocyst didn’t differ significantly for C (58%), OPS (55%) and CPS (64%), but was significantly lower than control (72%) for C(P<0.05) and OPS (P<0.01).

    Conclusion

    This Study revealed that the CPS method seems to be a usful procedure for cryopreservation of two-cell mouse embryo.

  • Ahmadi K *, Solgui Gh Pages 75-80
    Introduction

    It has been shown that gama-IFN is one of the major cytokines involved in lung fibrosis. It has also been demonstrated that Nitric Oxide (NO) may exert vasodilation, edema and cytotoxicity, and it may stimulate cytokinedependent processes in the lungs. In this study, the effect of 17-beta Estradiol (17-betaE2) and five alpha dihydrotestosterone (5alfa-DHT) on NO release by TGF beta treated alveolar macrophages was investigated.

    Material and Methods

    Alveolar macrophages were obtained by bronco alveolar lavage of healthy male rats aged 8 to 10 weeks in the usual manner. Lavaged cells (95% alveolar macrophages) were plated out at 1x105 cells/well using a 24 well flat bottomed cell culture plate. Cells were incubated for 2hrs at 37°C and 5% CO2. Non adherent cells were removed by three washings and alveolar macrophages were covered with 1 ml complete medium without phenol Red containing 10 µg/ml LPS,100U gama-IFN and different concentration of 17beta E2 or 5alfa-DHT in the presence or absence of TGF beta. Cells were incubated for another 24h and supernatants were collected and Nitrite was measured using indicator of NO by Griess method.

    Results

    Results showed that TGF-beta reduced 5alfa-DHT induced NO release. The minimum and maximum reduction in NO release was seen in response to 1x10-10M to 1x10-6M, indicating that TGF-beta was able to reduced 5alfa-DHT induced NO. It also showed that 17beta E2 reduced NO release in TGF-beta treated macrophages in a dose dependent fashion. The minimum and maximum inhibition in NO release was seen in response to 1x10-11M and 1x10-6M respectively.

    Conclusion

    According to results it seems that the part of pulmonary inflammation which is related to TGF-beta probably due to nitric oxide release and that sex hormones may play a role in this process.

  • Shapoury R *, Sattari M., Hassan Z.M Pages 81-84
    Introduction

    The most important virulence factor of Brucella is related to its capability of intraphagocytic survival. Brucella with this ability,causes persistant infection in host. Garlic extract, because of has organosulfur compounds such as allicin, has antimicrobial activity. The aim of this study was to investigate the effect of garlic choloroformic extract on intramacrophage Brucella spp.

    Material and Methods

    In this study, garlic choloroform was extracted and the quantity of allicin calculated with HPLC; then effect of the extract on intramacrophage survival of B.melitensis Rev1 and B.abortus S19 was studied on cell culture of mouse peritoneal macrophages.

    Results

    Results indicated that the extract was effective and eradicated intramacrophage Brucella in 1:40 (equal to 439 microgram per ml allicin), 1:80 (equal to 218 microgram per ml allicin) and 1:160 (equal to 128 microgram per ml allicin) extract dilutions after 24 hours.

    Conclusion

    Attention must be paid to antimicrobial effect of garlic on intramacrophage Brucella which, seems to be useful in treatment of brucellosis.

  • Mowla SJ*, Nikpoor P, Tiraihi T, Emadi Baygi M Pages 85-90
    Introduction

    Survivin, an inhibitor of apoptosis (IAP) containing one baculoviral IAP repeat (BIR) domain, has been reported to be able to regulate both cellular proliferation and apoptotic cell death. In the present study, we evaluated the differential expression of different variants of survivin during prenatal and postnatal development of brain in mice. Material and Methods A total of 27 NMRI mice were categorized into 9 age groups and brain specimens were obtained accordingly (n=3 per each group): 11 and 17 days embryos and newborn from which the remaining brains were collected by intervals of 5 days up to 1 month of age. Total RNA was extracted from each brain and Reverse Transcription was performed by oligo dT and M-MLV enzyme. cDNAs were amplified with primers specific for survivin and ?2 microglobulin (as an internal control) via polymerase chain reaction technique.

    Results

    We demonstrated that survivin is expressed during both fetal and postnatal development of brain in mice. RT-PCR performed on survivin showed two different variants of survivin with different intensities. The expression of the bigger variant (survivin140) during both prenatal development and at birth was significantly higher than its postnatal one.

    Conclusion

    Our data suggests that the expression of survivin140 in brain is developmentally regulated; such a regulation may play a role in homeostasis of brain, and in refinement of synapses.

  • Naderi N., Moazeni S.M *, Alimoghaddam K., Ghvamzadeh A., Pourfathollah A.A Pages 91-96
    Introduction

    Enrichment of intact peripheral blood dendritic cells (DCs) has been done using rosette and immunomagnetic depletion techniques.

    Material and Methods

    Peripheral blood mononuclear cells were separated using ficoll density gradient centrifugation and T lymphocytes were depleted through reaction with AET- treated sheep red blood cells. The remaining cells were depleted from lineage marker positive cells using monoclonal antibodies against CD3, CD11b, CD14, CD16, CD19, CD56 and anti- mouse IgG magnetic beads. Flowcytometric analysis was used to determine the purity of the obtained DCs through HLA-DR expression and lack of lineage markers.

    Results

    The obtained results showed that a significant population of isolated cells (58.5% ± 4.5, n=5) fail to react with anti-lineage marker monoclonal antibodies but express the HLA-DR antigen. Conclusion Immunomagnetic depletion is a new method for DCs separation that unlike classic methods, can isolate DCs in intact form. According to our information, this is the first report of DCs separation in Iran and purity of the obtained DCs is comparable with similar studies in other countries. Significant enrichment of intact DCs could facilitate the study of DCs natural functions in different fields such as autoimmunity, cancers and infectious diseases.

  • Ahmadi K. *, Solgui Gh Pages 97-102
    Introduction

    Cyclosporin A (CYA) is a potent immunosuppressive drug widely used in transplant settings due to its specific inhibition of T–cell activation. Several Studies have reported the synergistic effect of CyA with hematopoietic growth factor in colony culture of mice bone marrow. We Studied the effect of IL-3, IL-6, SCF,CyA and nutrition medium ( condition medium - PHA) on the development of hematopoietic cells of human bone marrow because this unique cyclic endecapeptide has been successfully utilized in organ transplantation for graft rejection and graft versus host disease and also since CYA stimulates colony formation by hematopoietic cells in vitro.

    Material and Methods

    Human bone marrow cells were taken from the posterior illiac crest of volunteer donors aged 5-35 years. Cells were cultured in complete culture medium (Containing 12.5% FCS 12.5% horse serum and 50 µmol Hydrocortisone with IL-3, IL-6, SCF and CY-A) on 24 –well microplates at 37 degree centigrade with 5% co2 for 4 week and colony culture was performed for 14 days in semisolid Agar medium .The cell count by light microscope and colony assay by inverted microscope were performed weekly for four weeks.

    Results

    Long term bone marrow culture and semisolid agar culture stimulation with IL-3, IL-6 , SCF and CyA had two as much cloning efficiencies than that of parallel cultures without CyA and IL-3, IL-6 ,SCF in inducing proliferation and conservation of CFU – GM in Bone marrow culture. Culture inactive PHA- condition medium showed higher stimulation than active condition medium. Cloning efficiencies were calculated by mean mean colony number per medium and data were presented as comparison of mean colonies in CyA group to control group.

    Conclusion

    Statistical analysis using the t-student test was performed to determine significance of differences between cultures in presence or absence of CyA. Consequently,these results show a direct positive effect of Cy A on the signal transduction pathways in hematopoietic stem and progenitor cells.

  • Hossein Baharvand*, Maryam Hatami, Narges Zare Pages 103-109