فهرست مطالب

مجله سلول و بافت
سال دهم شماره 3 (پاییز 1398)

  • تاریخ انتشار: 1398/07/01
  • تعداد عناوین: 6
|
  • سپیده رستمی*، محمدتقی بیگی‏ نصیری، محمد نظری، صالح طباطبایی وکیلی صفحات 133-142
    هدف

    پژوهش حاضر به منظور بررسی استفاده از سطوح مختلف لسیتین سویا در رقیق کننده تریس بر کیفیت منی و نسبت جنسیت با استفاده از تکنیک real-time qPCR اجرا شد.

    مواد و روش ها

    نمونه گیری از چهار گاو نر نژاد هلشتاین، یک بار در هفته انجام شد و سپس نمونه های مناسب با هم مخلوط شدند. نمونه های اسپرم (در چهار تکرار) به سه گروه شامل صفر، یک و دو درصد لسیتین سویا اختصاص داده شد. و فراسنجه های کیفی و نیز نسبت جنسیت منی در آن ها تعیین شد. در این تحقیق به منظور شستشوی منی و حذف سلول های مرده، از تکنیک شنا به‏سمت بالا (Swim up) استفاده شد. ژن‏های PLP و SRY به‏ ترتیب برای جداسازی قطعات خاصی از توالی‏ های کروموزوم X- وY- تکثیر شدند. در این روش PAR به عنوان ژن مرجع جهت نرمال سازی داده های حاصل از بیان ژن در واکنش real- time qPCR استفاده شد.

    نتایج

    نتایج پژوهش حاضر نشان داد که تکنیک Swim up و سطوح مختلف لسیتین سویا موجب بهبود کیفیت منی شدند. علاوه‏ براین، استفاده از تکنیک Swim up باعث کاهش معنی دار بیان ژن PLP (11/0±75/0) و افزایش معنی دار بیان ژن SRY (13/0±37/1) شد. اما استفاده از سطوح مختلف لسیتین سویا تغییری در نسبت جنسیت اسپرم ایجاد نکرد.

    نتیجه گیری

    به‏ طورکلی، لسیتین سویا یک‏ جایگزین مناسب برای منابع حیوانی بوده و موجب بهبود کیفیت مایع منی می‏شود. با توجه به محدودیت های موجود در استفاده از منابع حیوانی در رقیق کننده گاو، استفاده از لسیتین سویا به‏ عنوان یک منبع گیاهی پیشنهاد می‏شود.

    کلیدواژگان: تکنیک real- time qPCR، لسیتین سویا، نسبت جنسیت
  • غزاله گلشن ‏راد، شهره زارع کاریزی*، مرتضی کریمی ‏پور صفحات 143-151
    هدف

    در این تحقیق ارتباط miR-33a، miR-429 و miR-200c با مسیر EMT در سرطان سلول های غیرکوچک ریه، مورد بررسی قرار گرفت.

    مواد و روش ها

    در این مطالعه از روش Real Time-PCR برای ارزیابی تغییرات بیان miRNA های مذکور از 30 بافت توموری سلول‏های غیرکوچک ریه (NSCLC) (66 درصد در مرحله I و II و 34 درصد بیماران در مرحله III) استفاده شد. پس از استخراج RNA  از نمونه‏ های بافتی سنتز    cDNAبا استفاده از پرایمرهای ساقه حلقه انجام شد. بررسی کمی میزان بیان ژن‏های فوق الذکر با استفاده از پرایمرهای اختصاصی انجام و آنالیز داده ها با فرمول-∆∆ct 2 صورت گرفت.

    نتایج

    ارزیابی تغییرات بیان برای miR-33a نشان دادکه تعداد 11 نمونه از 30 نمونه توموری افزایش بیان داشتند.miR-429  افزایش بیان در 12 نمونه توموری و miR-200c افزایش بیان در 18 نمونه توموری داشتند. اما این تغییرات معنی ‏دار نبود (به ‏ترتیب 09/0=p، 084/0p و 072/0=p).

    نتیجه گیری

    از آن‏جایی‏که نمونه ‏های این مطالعه در مراحل ابتدایی سرطان بودند، شاید توجیه کننده عدم تغییر بیان معنی‏دار می‏باشد. همچنین این پژوهش در مقیاس کوچک طراحی شده، لذا برای به‏دست آوردن نتایج دقیق تر، تحقیقات بیشتر و افزایش تعداد نمونه ها نیاز است.

    کلیدواژگان: سرطان سلولهای غیرکوچک ریه، انتقال اپیتلیال-مزانشیمی، miRNA
  • مریم قدرتی سیاهمزگی، محمدعلی نصیری خلیلی*، مهدی زین الدینی، سیروس خدادادی، نسرین زرکار، نسرین فرامرزی صفحات 152-160
    هدف

    هدف از مطالعه ی حاضر، تولید پروتئین نوترکیب هیبریدی DT389GCSF به فرم فعال محلول در باکتری E. coli Bl-21(DE3) ، تخلیص و ارزیابی سمیت سلولی آن می باشد.

    مواد و روش‏ها

    پروتئین DT389GCSF، با دنباله ی 6 هیستیدین در باکتری E. coli BL-21(DE3)  در دمای 28 درجه سانتیگراد به ‏فرم محلول بیان شد. سپس از طریق ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل سفاروز تخلیص شد. در نهایت عملکرد پروتئین نوترکیب خالص شده با استفاده از آزمون  TTM  بر روی سلول سرطانی 06-LH مورد ارزیابی قرار گرفت.

    نتایج

    میزان بیان و خلوص پروتئین DT389GCSF با استفاده از نرم افزار Image J، به ‏ترتیب در حدود 12 و 80 درصد تخمین زده شد. میزان IC50 پس از 48 ساعت قرارگیری پروتئین DT389GCSF در معرض رده ی سلولی، در حدود 000019/0±00017/0 مولار بود.

    نتیجه ‏گیری

    با کاهش دما و استفاده از مکانیسم درون سلولی، می توان بازتاخوردگی پروتئین هیبریدی DT389GCSF را به‏ شکل مناسب و به ‏فرم فعال مشاهده نمود. در نتیجه در مراحل تولید آزمایشگاهی ایمونوتوکسین‏های مربوطه می‏توان با استفاده از این روش، از مراحل تولید به ‏صورت اینکلوژن بادی صرف‏نظر کرد.

    کلیدواژگان: ایمونوتوکسین، فاکتور محرک رشد کلونی گرانولوسیت، بیان، خالص ‏سازی، فرم فعال
  • محسن جعفری* صفحات 161-167
    هدف

    هدف از انجام این تحقیق بررسی تاثیر 12 هفته تمرین تناوبی شدید (HIT) و تمرین مداوم کم شدت (LIT) بر بیان ژن RXRα در رت‏های نر ویستار پس از رژیم پرچرب بود.

    مواد و روش‏ها

     آزمودنی‏ها پس از 13 هفته دریافت رژیم پرچرب به گروه‏های کنترل، تمرین HIT و تمرین LIT تقسیم شدند. سپس گروه‏های مورد بررسی تمرینات ورزشی را به ‏مدت 12 هفته انجام دادند. در پایان تمرینات میزان بیان ژن RXRα مورد بررسی قرار گرفت.

    نتایج

    نتایج نشان داد که میزان بیان ژن RXRα در گروه تمرین HIT بیش از LIT و در گروه تمرین LIT بیش از کنترل بوده است و همه تفاوت‏ها معنی ‏دار بودند (05/0<p).

    نتیجه گیری

    به ‏طورکلی پس از 13 هفته رژیم پرچرب، 12 هفته تمرین‏هایHIT و LIT می‏تواند در افزایش بیان ژن RXRα موثر باشد و به ‏عنوان یک راهبرد غیردارویی موثر برای مقابله با اثرات آتروژنیک چاقی و اضافه وزن در نظر گرفته شود.

    کلیدواژگان: تمرین اینتروال شدید، تمرین استقامتی، گیرنده ایکس رتینوئید، رژیم پرچرب
  • مرتضی زارعی*، لطف الله خواجه پور، مهناز کسمتی، حسین نجف ‏زاده صفحات 168-180
    هدف

    در این مطالعه اثر نانواکسید منیزیم بر یادگیری و حافظه و تغییرات بیوشیمیایی هیپوکمپ در موش‏های صحرایی محروم شده از خواب، مورد ارزیابی قرار گرفته است.

    مواد و روش‏ها

    در این مطالعه از موش‏های نر در گروه‏های کنترل، محرومیت از خواب و دریافت کننده ‏های نانواکسید منیزیم با دوزهای 1 و 5 و 10 میلی‏گرم بر کیلوگرم، استفاده شد. جهت ارزیابی حافظه احترازی غیر‏فعال از دستگاه استپ ثرو استفاده شده است. جهت بررسی بیوشیمیایی از کیت آزمایشگاهی و بررسی قند خون از گلوکومتر استفاده شد.

    نتایج

    نتایج نشان داد که نانو اکسید منیزیم با دوز 10 میلی‏گرم بر کیلوگرم،  باعث بهبود حافظه در موش‏ها می‏شود که به ‏وسیله محرومیت از خواب دچار نقص حافظه شده بودند. علاوه بر تغییرات رفتاری فوق، مشاهده شد که محرومیت از خواب باعث کاهش سطح آمینواسید تاورین و افزایش قند خون وافزایش فعالیت آنزیم کولین‏استراز می‏شود و تاثیر معنی‏داری بر فاکتور رشد مشتق از مغز نداشت. با به‏ کارگیری نانواکسید منیزیم، میزان قند خون و فعالیت آنزیم کولین‏استراز، کاهش یافت ولی میزان آمینواسید تاورین تغییر نکرد.

    نتیجه‏ گیری

    یافته ‏ها نشان می‏دهند که نانواکسید منیزیم علاوه بر اثرات رفتاری باعث تغییر در میزان فاکتورهای بیوشیمیایی موثر بر حافظ می‏شود. بنابراین برای یافتن  نحوه اثر مثبت این ماده بر حافظه، لازم است اثر این ماده بر سایر فاکتورهای موثر بر حافظه، نیز مورد بررسی قرار گیرد.

    کلیدواژگان: نانواکسید منیزیم، حافظه محرومیت از خواب
  • رضا نجفی ‏زنگیر، اسدالله اسدی*، صابر زهری صفحات 181-192
    هدف

    تهیه داربست زیستی مشتق از مثانه گوسفند با روش ترکیبی (فیزیکی وشیمیایی) و بررسی زیست سازگاری داربست

    مواد و روش‏ها

    سلول ‏زدایی مثانه گوسفند به‏روش فیزیکی و شیمیایی انجام شد. قطعات مثانه به‏مدت 24 ساعت در فریزر 4- درجه سانتی گراد  قرار گرفته و هر 6 ساعت به ‏مدت 10 دقیقه در محلول (1/0 درصد) سدیم‏ آزید گذاشته شد. بعد از 24 ساعت به‏ مدت 2 و 1 ساعت به ‏ترتیب در فریزر 20- و 40- درجه سانتی گراد  قرار داده شدند. سپس نمونه ‏ها در 5 مرحله 2 دقیقه ‏ایی توسط لوله سرد در ازت مایع قرارگرفته و توسط بافر فسفات نمکی حاوی (1/0 درصد) سدیم ‏آزید شست‏ وشو شدند. در سلول‏ زدایی شیمیایی تمامی قطعات مثانه به ‏مدت 24 ساعت در محلول سدیم‏ دودسیل سولفات همراه با همزدن آرام گرفته، پس از شست ‏و‏شوی نمونه‏ ها با آب مقطر، به‏ وسیله اتانول 75 درصد و پراستیک اسید 2/0 درصد استریل شدند و در نهایت به‏ مدت 24 ساعت در محلول نمک فسفات قرار گرفتند.

    نتایج

    مطالعات میکروسکوپی نوری و الکترونی نشان داد که سلول‏های بنیادی کشت شده بر روی داربست مثانه گوسفند، در روزهای 3، 5 و 7 با گذشت زمان سازگاری افزاینده داشته و در پایان روز 7 داربست مثانه بیشترین زیست سازگاری را نشان می دهد.

    نتیجه ‏گیری

    مثانه گوسفند سلول‏زدایی شده، زیست سازگاری مناسبی را دارا بوده و به‏ عنوان داربست زیست سازگار غیرسمی بالقوه در مهندسی بافت و پزشکی بازساختی می‏تواند مطرح شد.

    کلیدواژگان: داربست، سلول‏های بنیادی مزانشیم، زیست سازگاری، مثانه
|
  • S. Rostami*, MT. Beigi Nassiri, M. Nazari, S. Tabatabaei Vakili Pages 133-142
    Aim

    This study was designed to investigate the use of different levels of soybean lecithin in the Tris extender on semen quality and sex ratio using real-time qPCR technique.

    Material and Methods

    Sampling of 4 Holstien bulls was performed once a week, then the appropriate samples were mixed. Samples of sperm (in 4 replications) were divided into three groups: zero, one and two percentage soybean lecithin. The qualitative parameters and the sex ratio of the semen were determined. Swim up technique was used to wash the semen and remove the dead cells. Moreover, the PLP and SRY genes were propagated to separate the specific fragments of X- and Y- chromosomes sequences. In this procedure, PAR was used as a housekeeping gene to normalize the gene expression data in real-time qPCR.

    Results

    The results showed that swim up technique and different levels of soybean lecithin improve the semen quality. In addition, swim up technique significantly reduced PLP gene expression (0.75±0.11), against increased SRY gene expression (1.37±0.13). However, using of different levels of soybean lecithin did not change the sex ratio of the sperms.

    Conclusion

    In general, soybean lecithin is an appropriate substitute to animal sources and improves the quality of semen. Due to the limitations of using animal resources in bull extenders, the use of soybean lecithin as a plant source is suggested.

    Keywords: real- time qPCR technique, Soybean lecithin, Sex ratio
  • Gh. Golshan Rad, Sh. Zare Karizi*, M. Karimipoor Pages 143-151
    Aim

    In this study, the correlation of miR-33a, miR-429 and miR-200c with EMT pathway was investigated in the non-small cell lung cancer.

    Material and methods

    Real-Time PCR was used to evaluate the expression levels of the mentioned miRNA in 30 non-small cell lung tumor tissues (66% of cells were in stages I, II and the rest were in stage III). RNA extraction was performed and cDNA synthesized using stem-loop primers. The quantitative evolution of gene expression were performed using specific primers and data was analyzed by 2-∆∆ct

    Results

    The evaluation of expression changes for miR-33a showed that 11 samples were up-regulated. miR-429 and miR-200c showed an increased expressions in 12 and 18 tumor samples, respectively. There was no significant difference between the levels of expression (P≤ 0.05).

    Conclusion

    There was no significant change in the level of expression of miR-33a, miR-429 and miR-200c. These results could be due to sample size or the early stage of samples.

    Keywords: non-small cell lung cancer, Epithelial–mesenchymal transition. miRNA
  • M .Ghodrati Siahmazgi, MA. Nasiri Khalili*, M. Zeinoddini, S. Khodadadi, N. Zarkar, N. Faramarzi Pages 152-160
    Aim

    This study aimed to produce recombinant hybrid protein, DT389GCSF, in E. coli BL-21(DE3) in a soluble and active form and to purify it and evaluate its cytotoxicity.

    Material and Methods

    The protein, His6-tagged DT389GCSF was expressed in E. coli BL-21(DE3) in a soluble form at 28 °C. Then it was purified by affinity chromatography on nickel sepharose column. Finally, the function of purified recombinant protein was evaluated by MTT assay on HL-60 cancer cell line.

    Results

    The yield of expression and purification of DT389GCSF were determined at about 12 and 80 percent, respectively, using Image J software. The IC50 value upon 48 hours of exposure of DT389GCSF toward cell line was about 0.00017±0.000019 M.

    Conclusion

    By reducing the temperature and using the intracellular mechanism, the refolding of hybrid protein, DT389GCSF, can be observed in a proper and active form. As a result, in vitro production of relevant immunotoxins, by using this method, the steps of inclusion body production can be neglected.

    Keywords: Immunotoxin, Granulocyte Colony Stimulating Factor, Expression, Purification, active form
  • M .Jafari* Pages 161-167
    Aim

    The aim of this study was to investigate the effects of 12 weeks high-intensity interval training (HIT) and low-intensity continuous training (LIT) on RXRα gene expression in male wistar rats after a high fat-diet.

    Material and Methods

    Subjects after 13 weeks high-fat diet were divided into three groups: control, HIT training and LIT training. Then experimental groups performed exercise training for 12 weeks. After training, RXRα gene expression was analyzed.

    Results

    the results indicated RXRα gene expression in the HIT group was higher than the LIT group and also in the LIT group was higher than the control group. All of the observed differences were significant (P≤0/05).

    Conclusion

    in total, 12 weeks HIT and LIT after 13 weeks high-fat diet may be effective in increment of RXRα gene expression that is an effective non-pharmacological strategy for atherogenic effects of obesity and overweight.

    Keywords: High-Intensity Interval Training_Endurance Training_Retinoid X Receptor_High-fat diet
  • M .Zarei*, LA. Khajehpour, M. Kesmati, H .Najafzadeh Pages 168-180
    Aim

    The aim of the current study was to evaluate the effect of magnesium Nano Oxide on learning and memory and biochemical changes in the hippocampus of sleep-deprived rats. 

    Material and Methods

    In this study, male rats were used in control groups whereas others used rats were sleep deprived and the rats receiving Magnesium Nano Oxide with doses of 1, 5, and 10 mg/kg. Step-through apparatus was used to evaluate passive avoidance memory. Laboratory kit and glucometer were used for biochemical evaluation.

    Results

    The results showed that the magnesium Nano oxide  in 10 mg/kg/rat can result in increasing efficiency of memory in male rats that experienced memory impaired resulted from sleep deprivation .In addition to afore-mentioned behavioral changes, the investigator found that sleep deprivation decreases the level of Taurine Amino Acid. However, it can increase the blood sugar and cholinesterase enzyme activity. In addition, it didn''''''''t have significant effect on Brain-derived Neurotrophic factor. Upon application of Magnesium Nano oxide, the amount of blood sugar and collinstrase enzyme activity lowered, but the amount of Taurine Amino Acid remained unchanged. 

    Conclusion

    The findings show that in addition to behavioral effects, magnesium Nano oxide causes a change in the amount of biochemical factors affecting memory. That needs to be further investigated.

    Keywords: Magnesium Nano Oxide, Memory, Sleep Deprivation
  • R .Najafi Zangir, A. Asadi*, S. Zahri Pages 181-192
    Aim

    This study was aimed to preparation of sheep urinary bladder derived from biological scaffold by a combined (physical and chemical) method and evaluation of scaffold biocompatibility.  

    Materials and Methods

    Urinary bladder decellularization was performed by physical and chemical methods. In the physical method, the bladder fragments were incubated at -4 °C for 24 h and intervaled the fragments each 6 h by placing for 10 min in 0.1% sodium azide solution. After 24 h, the samples were placed at -20 and -40 °C for 2 and 1 h, respectively. The bladder fragments were held in a cryotube and emerged in liquid nitrogen by five two-minute steps, and finally washed by the PBS buffer containing 0.1% sodium azide. In the chemical decellularization, all of the physically treated bladder fragments were placed in a sodium dodecyl sulphate solution under slow stirring for 24 h. The samples were rinsed with sterile distilled water, sterilized with 75% ethanol and 0.2% peracetic acid and finally were placed in PBS for 24 h.

    Results

    The light and electron microscopey studies revealed the biocompatibility of seeded stem cells on the sheep bladder bioscaffold, in 3rd, 5th and 7th days. The most biocompatibility was observed in the end of 7th day.

    Conclusion

    Decellularized urinary bladder scaffold revealed biocompatibility which could be considered as a potential nontoxic and biocompatible bioscaffold for application in tissue engineering regenerative medicine.

    Keywords: Scaffold, Urinary bladder, Mesenchymal stem cells, biocompatibility