فهرست مطالب
مجله سلول و بافت
سال دهم شماره 3 (پاییز 1398)
- تاریخ انتشار: 1398/07/01
- تعداد عناوین: 6
-
-
صفحات 133-142هدف
پژوهش حاضر به منظور بررسی استفاده از سطوح مختلف لسیتین سویا در رقیق کننده تریس بر کیفیت منی و نسبت جنسیت با استفاده از تکنیک real-time qPCR اجرا شد.
مواد و روش هانمونه گیری از چهار گاو نر نژاد هلشتاین، یک بار در هفته انجام شد و سپس نمونه های مناسب با هم مخلوط شدند. نمونه های اسپرم (در چهار تکرار) به سه گروه شامل صفر، یک و دو درصد لسیتین سویا اختصاص داده شد. و فراسنجه های کیفی و نیز نسبت جنسیت منی در آن ها تعیین شد. در این تحقیق به منظور شستشوی منی و حذف سلول های مرده، از تکنیک شنا بهسمت بالا (Swim up) استفاده شد. ژنهای PLP و SRY به ترتیب برای جداسازی قطعات خاصی از توالی های کروموزوم X- وY- تکثیر شدند. در این روش PAR به عنوان ژن مرجع جهت نرمال سازی داده های حاصل از بیان ژن در واکنش real- time qPCR استفاده شد.
نتایجنتایج پژوهش حاضر نشان داد که تکنیک Swim up و سطوح مختلف لسیتین سویا موجب بهبود کیفیت منی شدند. علاوه براین، استفاده از تکنیک Swim up باعث کاهش معنی دار بیان ژن PLP (11/0±75/0) و افزایش معنی دار بیان ژن SRY (13/0±37/1) شد. اما استفاده از سطوح مختلف لسیتین سویا تغییری در نسبت جنسیت اسپرم ایجاد نکرد.
نتیجه گیریبه طورکلی، لسیتین سویا یک جایگزین مناسب برای منابع حیوانی بوده و موجب بهبود کیفیت مایع منی میشود. با توجه به محدودیت های موجود در استفاده از منابع حیوانی در رقیق کننده گاو، استفاده از لسیتین سویا به عنوان یک منبع گیاهی پیشنهاد میشود.
کلیدواژگان: تکنیک real- time qPCR، لسیتین سویا، نسبت جنسیت -
صفحات 143-151هدف
در این تحقیق ارتباط miR-33a، miR-429 و miR-200c با مسیر EMT در سرطان سلول های غیرکوچک ریه، مورد بررسی قرار گرفت.
مواد و روش هادر این مطالعه از روش Real Time-PCR برای ارزیابی تغییرات بیان miRNA های مذکور از 30 بافت توموری سلولهای غیرکوچک ریه (NSCLC) (66 درصد در مرحله I و II و 34 درصد بیماران در مرحله III) استفاده شد. پس از استخراج RNA از نمونه های بافتی سنتز cDNAبا استفاده از پرایمرهای ساقه حلقه انجام شد. بررسی کمی میزان بیان ژنهای فوق الذکر با استفاده از پرایمرهای اختصاصی انجام و آنالیز داده ها با فرمول-∆∆ct 2 صورت گرفت.
نتایجارزیابی تغییرات بیان برای miR-33a نشان دادکه تعداد 11 نمونه از 30 نمونه توموری افزایش بیان داشتند.miR-429 افزایش بیان در 12 نمونه توموری و miR-200c افزایش بیان در 18 نمونه توموری داشتند. اما این تغییرات معنی دار نبود (به ترتیب 09/0=p، 084/0p و 072/0=p).
نتیجه گیریاز آنجاییکه نمونه های این مطالعه در مراحل ابتدایی سرطان بودند، شاید توجیه کننده عدم تغییر بیان معنیدار میباشد. همچنین این پژوهش در مقیاس کوچک طراحی شده، لذا برای بهدست آوردن نتایج دقیق تر، تحقیقات بیشتر و افزایش تعداد نمونه ها نیاز است.
کلیدواژگان: سرطان سلولهای غیرکوچک ریه، انتقال اپیتلیال-مزانشیمی، miRNA -
صفحات 152-160هدف
هدف از مطالعه ی حاضر، تولید پروتئین نوترکیب هیبریدی DT389GCSF به فرم فعال محلول در باکتری E. coli Bl-21(DE3) ، تخلیص و ارزیابی سمیت سلولی آن می باشد.
مواد و روشهاپروتئین DT389GCSF، با دنباله ی 6 هیستیدین در باکتری E. coli BL-21(DE3) در دمای 28 درجه سانتیگراد به فرم محلول بیان شد. سپس از طریق ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل سفاروز تخلیص شد. در نهایت عملکرد پروتئین نوترکیب خالص شده با استفاده از آزمون TTM بر روی سلول سرطانی 06-LH مورد ارزیابی قرار گرفت.
نتایجمیزان بیان و خلوص پروتئین DT389GCSF با استفاده از نرم افزار Image J، به ترتیب در حدود 12 و 80 درصد تخمین زده شد. میزان IC50 پس از 48 ساعت قرارگیری پروتئین DT389GCSF در معرض رده ی سلولی، در حدود 000019/0±00017/0 مولار بود.
نتیجه گیریبا کاهش دما و استفاده از مکانیسم درون سلولی، می توان بازتاخوردگی پروتئین هیبریدی DT389GCSF را به شکل مناسب و به فرم فعال مشاهده نمود. در نتیجه در مراحل تولید آزمایشگاهی ایمونوتوکسینهای مربوطه میتوان با استفاده از این روش، از مراحل تولید به صورت اینکلوژن بادی صرفنظر کرد.
کلیدواژگان: ایمونوتوکسین، فاکتور محرک رشد کلونی گرانولوسیت، بیان، خالص سازی، فرم فعال -
صفحات 161-167هدف
هدف از انجام این تحقیق بررسی تاثیر 12 هفته تمرین تناوبی شدید (HIT) و تمرین مداوم کم شدت (LIT) بر بیان ژن RXRα در رتهای نر ویستار پس از رژیم پرچرب بود.
مواد و روشهاآزمودنیها پس از 13 هفته دریافت رژیم پرچرب به گروههای کنترل، تمرین HIT و تمرین LIT تقسیم شدند. سپس گروههای مورد بررسی تمرینات ورزشی را به مدت 12 هفته انجام دادند. در پایان تمرینات میزان بیان ژن RXRα مورد بررسی قرار گرفت.
نتایجنتایج نشان داد که میزان بیان ژن RXRα در گروه تمرین HIT بیش از LIT و در گروه تمرین LIT بیش از کنترل بوده است و همه تفاوتها معنی دار بودند (05/0<p).
نتیجه گیریبه طورکلی پس از 13 هفته رژیم پرچرب، 12 هفته تمرینهایHIT و LIT میتواند در افزایش بیان ژن RXRα موثر باشد و به عنوان یک راهبرد غیردارویی موثر برای مقابله با اثرات آتروژنیک چاقی و اضافه وزن در نظر گرفته شود.
کلیدواژگان: تمرین اینتروال شدید، تمرین استقامتی، گیرنده ایکس رتینوئید، رژیم پرچرب -
صفحات 168-180هدف
در این مطالعه اثر نانواکسید منیزیم بر یادگیری و حافظه و تغییرات بیوشیمیایی هیپوکمپ در موشهای صحرایی محروم شده از خواب، مورد ارزیابی قرار گرفته است.
مواد و روشهادر این مطالعه از موشهای نر در گروههای کنترل، محرومیت از خواب و دریافت کننده های نانواکسید منیزیم با دوزهای 1 و 5 و 10 میلیگرم بر کیلوگرم، استفاده شد. جهت ارزیابی حافظه احترازی غیرفعال از دستگاه استپ ثرو استفاده شده است. جهت بررسی بیوشیمیایی از کیت آزمایشگاهی و بررسی قند خون از گلوکومتر استفاده شد.
نتایجنتایج نشان داد که نانو اکسید منیزیم با دوز 10 میلیگرم بر کیلوگرم، باعث بهبود حافظه در موشها میشود که به وسیله محرومیت از خواب دچار نقص حافظه شده بودند. علاوه بر تغییرات رفتاری فوق، مشاهده شد که محرومیت از خواب باعث کاهش سطح آمینواسید تاورین و افزایش قند خون وافزایش فعالیت آنزیم کولیناستراز میشود و تاثیر معنیداری بر فاکتور رشد مشتق از مغز نداشت. با به کارگیری نانواکسید منیزیم، میزان قند خون و فعالیت آنزیم کولیناستراز، کاهش یافت ولی میزان آمینواسید تاورین تغییر نکرد.
نتیجه گیرییافته ها نشان میدهند که نانواکسید منیزیم علاوه بر اثرات رفتاری باعث تغییر در میزان فاکتورهای بیوشیمیایی موثر بر حافظ میشود. بنابراین برای یافتن نحوه اثر مثبت این ماده بر حافظه، لازم است اثر این ماده بر سایر فاکتورهای موثر بر حافظه، نیز مورد بررسی قرار گیرد.
کلیدواژگان: نانواکسید منیزیم، حافظه محرومیت از خواب -
صفحات 181-192هدف
تهیه داربست زیستی مشتق از مثانه گوسفند با روش ترکیبی (فیزیکی وشیمیایی) و بررسی زیست سازگاری داربست
مواد و روشهاسلول زدایی مثانه گوسفند بهروش فیزیکی و شیمیایی انجام شد. قطعات مثانه بهمدت 24 ساعت در فریزر 4- درجه سانتی گراد قرار گرفته و هر 6 ساعت به مدت 10 دقیقه در محلول (1/0 درصد) سدیم آزید گذاشته شد. بعد از 24 ساعت به مدت 2 و 1 ساعت به ترتیب در فریزر 20- و 40- درجه سانتی گراد قرار داده شدند. سپس نمونه ها در 5 مرحله 2 دقیقه ایی توسط لوله سرد در ازت مایع قرارگرفته و توسط بافر فسفات نمکی حاوی (1/0 درصد) سدیم آزید شست وشو شدند. در سلول زدایی شیمیایی تمامی قطعات مثانه به مدت 24 ساعت در محلول سدیم دودسیل سولفات همراه با همزدن آرام گرفته، پس از شست وشوی نمونه ها با آب مقطر، به وسیله اتانول 75 درصد و پراستیک اسید 2/0 درصد استریل شدند و در نهایت به مدت 24 ساعت در محلول نمک فسفات قرار گرفتند.
نتایجمطالعات میکروسکوپی نوری و الکترونی نشان داد که سلولهای بنیادی کشت شده بر روی داربست مثانه گوسفند، در روزهای 3، 5 و 7 با گذشت زمان سازگاری افزاینده داشته و در پایان روز 7 داربست مثانه بیشترین زیست سازگاری را نشان می دهد.
نتیجه گیریمثانه گوسفند سلولزدایی شده، زیست سازگاری مناسبی را دارا بوده و به عنوان داربست زیست سازگار غیرسمی بالقوه در مهندسی بافت و پزشکی بازساختی میتواند مطرح شد.
کلیدواژگان: داربست، سلولهای بنیادی مزانشیم، زیست سازگاری، مثانه
-
Pages 133-142Aim
This study was designed to investigate the use of different levels of soybean lecithin in the Tris extender on semen quality and sex ratio using real-time qPCR technique.
Material and MethodsSampling of 4 Holstien bulls was performed once a week, then the appropriate samples were mixed. Samples of sperm (in 4 replications) were divided into three groups: zero, one and two percentage soybean lecithin. The qualitative parameters and the sex ratio of the semen were determined. Swim up technique was used to wash the semen and remove the dead cells. Moreover, the PLP and SRY genes were propagated to separate the specific fragments of X- and Y- chromosomes sequences. In this procedure, PAR was used as a housekeeping gene to normalize the gene expression data in real-time qPCR.
ResultsThe results showed that swim up technique and different levels of soybean lecithin improve the semen quality. In addition, swim up technique significantly reduced PLP gene expression (0.75±0.11), against increased SRY gene expression (1.37±0.13). However, using of different levels of soybean lecithin did not change the sex ratio of the sperms.
ConclusionIn general, soybean lecithin is an appropriate substitute to animal sources and improves the quality of semen. Due to the limitations of using animal resources in bull extenders, the use of soybean lecithin as a plant source is suggested.
Keywords: real- time qPCR technique, Soybean lecithin, Sex ratio -
Pages 143-151Aim
In this study, the correlation of miR-33a, miR-429 and miR-200c with EMT pathway was investigated in the non-small cell lung cancer.
Material and methodsReal-Time PCR was used to evaluate the expression levels of the mentioned miRNA in 30 non-small cell lung tumor tissues (66% of cells were in stages I, II and the rest were in stage III). RNA extraction was performed and cDNA synthesized using stem-loop primers. The quantitative evolution of gene expression were performed using specific primers and data was analyzed by 2-∆∆ct
ResultsThe evaluation of expression changes for miR-33a showed that 11 samples were up-regulated. miR-429 and miR-200c showed an increased expressions in 12 and 18 tumor samples, respectively. There was no significant difference between the levels of expression (P≤ 0.05).
ConclusionThere was no significant change in the level of expression of miR-33a, miR-429 and miR-200c. These results could be due to sample size or the early stage of samples.
Keywords: non-small cell lung cancer, Epithelial–mesenchymal transition. miRNA -
Pages 152-160Aim
This study aimed to produce recombinant hybrid protein, DT389GCSF, in E. coli BL-21(DE3) in a soluble and active form and to purify it and evaluate its cytotoxicity.
Material and MethodsThe protein, His6-tagged DT389GCSF was expressed in E. coli BL-21(DE3) in a soluble form at 28 °C. Then it was purified by affinity chromatography on nickel sepharose column. Finally, the function of purified recombinant protein was evaluated by MTT assay on HL-60 cancer cell line.
ResultsThe yield of expression and purification of DT389GCSF were determined at about 12 and 80 percent, respectively, using Image J software. The IC50 value upon 48 hours of exposure of DT389GCSF toward cell line was about 0.00017±0.000019 M.
ConclusionBy reducing the temperature and using the intracellular mechanism, the refolding of hybrid protein, DT389GCSF, can be observed in a proper and active form. As a result, in vitro production of relevant immunotoxins, by using this method, the steps of inclusion body production can be neglected.
Keywords: Immunotoxin, Granulocyte Colony Stimulating Factor, Expression, Purification, active form -
Pages 161-167Aim
The aim of this study was to investigate the effects of 12 weeks high-intensity interval training (HIT) and low-intensity continuous training (LIT) on RXRα gene expression in male wistar rats after a high fat-diet.
Material and MethodsSubjects after 13 weeks high-fat diet were divided into three groups: control, HIT training and LIT training. Then experimental groups performed exercise training for 12 weeks. After training, RXRα gene expression was analyzed.
Resultsthe results indicated RXRα gene expression in the HIT group was higher than the LIT group and also in the LIT group was higher than the control group. All of the observed differences were significant (P≤0/05).
Conclusionin total, 12 weeks HIT and LIT after 13 weeks high-fat diet may be effective in increment of RXRα gene expression that is an effective non-pharmacological strategy for atherogenic effects of obesity and overweight.
Keywords: High-Intensity Interval Training_Endurance Training_Retinoid X Receptor_High-fat diet -
Pages 168-180Aim
The aim of the current study was to evaluate the effect of magnesium Nano Oxide on learning and memory and biochemical changes in the hippocampus of sleep-deprived rats.
Material and MethodsIn this study, male rats were used in control groups whereas others used rats were sleep deprived and the rats receiving Magnesium Nano Oxide with doses of 1, 5, and 10 mg/kg. Step-through apparatus was used to evaluate passive avoidance memory. Laboratory kit and glucometer were used for biochemical evaluation.
ResultsThe results showed that the magnesium Nano oxide in 10 mg/kg/rat can result in increasing efficiency of memory in male rats that experienced memory impaired resulted from sleep deprivation .In addition to afore-mentioned behavioral changes, the investigator found that sleep deprivation decreases the level of Taurine Amino Acid. However, it can increase the blood sugar and cholinesterase enzyme activity. In addition, it didn''''''''t have significant effect on Brain-derived Neurotrophic factor. Upon application of Magnesium Nano oxide, the amount of blood sugar and collinstrase enzyme activity lowered, but the amount of Taurine Amino Acid remained unchanged.
ConclusionThe findings show that in addition to behavioral effects, magnesium Nano oxide causes a change in the amount of biochemical factors affecting memory. That needs to be further investigated.
Keywords: Magnesium Nano Oxide, Memory, Sleep Deprivation -
Pages 181-192Aim
This study was aimed to preparation of sheep urinary bladder derived from biological scaffold by a combined (physical and chemical) method and evaluation of scaffold biocompatibility.
Materials and MethodsUrinary bladder decellularization was performed by physical and chemical methods. In the physical method, the bladder fragments were incubated at -4 °C for 24 h and intervaled the fragments each 6 h by placing for 10 min in 0.1% sodium azide solution. After 24 h, the samples were placed at -20 and -40 °C for 2 and 1 h, respectively. The bladder fragments were held in a cryotube and emerged in liquid nitrogen by five two-minute steps, and finally washed by the PBS buffer containing 0.1% sodium azide. In the chemical decellularization, all of the physically treated bladder fragments were placed in a sodium dodecyl sulphate solution under slow stirring for 24 h. The samples were rinsed with sterile distilled water, sterilized with 75% ethanol and 0.2% peracetic acid and finally were placed in PBS for 24 h.
ResultsThe light and electron microscopey studies revealed the biocompatibility of seeded stem cells on the sheep bladder bioscaffold, in 3rd, 5th and 7th days. The most biocompatibility was observed in the end of 7th day.
ConclusionDecellularized urinary bladder scaffold revealed biocompatibility which could be considered as a potential nontoxic and biocompatible bioscaffold for application in tissue engineering regenerative medicine.
Keywords: Scaffold, Urinary bladder, Mesenchymal stem cells, biocompatibility