فهرست مطالب
مجله سلول و بافت
سال دهم شماره 4 (زمستان 1398)
- تاریخ انتشار: 1398/12/21
- تعداد عناوین: 6
-
-
صفحات 193-201هدف
هدف از این مطالعه بررسی تاثیر ورزش هوازی بر بیان HSPA2 در بیضه و پارامترهای اسپرم در موشهای صحرایی دیابتی بود.
مواد و روشهاموشهای صحرایی نر نژاد ویستار 2 ماهه، بهطور تصادفی به سه گروه (هر گروه 10 سر): تقسیم شدند: کنترل (C)، دیابتی (D) و تمرین دیابتی (DT). دیابت از طریق یک نوبت تزریق داخل صفاقی استرپتوزوتوسین القا شد. موشهای گروه DT به مدت 8 هفته بر روی تردمیل تمرین استقامتی انجام دادند. 48 ساعت بعد از آخرین جلسه تمرین، بیضه ها از موش ها برداشته شدند و تحت آزمایش بافت شناسی قرار گرفتند. مایع منی تجزیه و تحلیل شد و RNA کل از بیضه ها برای اندازه گیری بیان HSPA2 mRNA با روش RT-qPCR جدا شد. برای تحلیل داده ها ازآزمون تحلیل واریانس استفاده شد (05/0>p).
نتایجیافته ها نشان داد در گروه D تعداد (001/0=p) و تحرک اسپرم (01/0=p) کم وهمچنین مورفولوژی غیرطبیعی اسپرم (001/0=p) بالا بود. علاوه بر این، در گروه D، بیان HSPA2 در بافت بیضه (01/0=p) به طور معنی دارکاهش یافته بود. برخلاف گروه D، در گروه DT، تعداد (04/0=p) و زنده مانی (02/0=p) و همچنین بیان HSPA2 (03/0=p) افزایش یافته بود.
نتیجه گیریدر بیضه های موش صحرایی، دیابت بیان HSPA2 را دچار تنظیم کاهشی می کند که در مجموع برای پارامترهای اسپرم زیانبار است. ورزش به طور موثر در برابر این اثرات مضر نقش حفاظتی دارد.
کلیدواژگان: ورزش، پروتئین شوک گرمایی A2، ناباروری، نر -
صفحات 202-213هدف
با توجه به پیشرفت و شیوع سرطان، تلاش بر این است که ترکیبهای جدید در جهت سرکوب تومور و همراه با سمیت کمتر باشند. طی دهه های گذشته به منظور توسعه سیستم انتقال دارو برای غلبه برمحدودیتهای داروهای رایج مورد استفاده در درمان بیماریها، نانو تکنولوژی بسیار مورد توجه قرار گرفته است.
مواد و روشهالذا در این مطالعه برای اولین بار نانوذرات ساماریوم با استفاده از روش شیمی سبز و به کمک عصاره زنجبیل سنتز شدند. سپس خصوصیات فیزیکوشیمیایی نانوذرات سنتزی با استفاده از تکنیک پراکنش نور دینامیکی (DLS)، طیف سنجی مادون قرمز (FT-IR) و میکروسکوپ الکترونی روبشی FE-SEM بررسی شد. در نهایت خواص ضدسرطانی و سمیت سلولی نانوذرات ساماریم در مقابل سلولهای سرطانی کولون رده سلولی HCT116 پس از 24 و 48 ساعت تیمار توسط آزمون رنگ سنجی تترازولیوم (MTT Assay) بررسی شد.
نتایجنتایج مطالعات پراکنش دینامکی نور و همچنین مطالعات مورفولوژیکی به کمک میکروسکوپ الکترونی روبشی بیانگر سنتز ناانوذرات کروی و همگن با ابعاد حدود 70 نانومتر میباشد. آزمون بقای سلولی میزان Cc50 (غلظتی از ترکیب که 50 درصد مرگ را در سلولهای سرطانی القا میکند) نانوذرات ساماریوم بر روی رده سلولی HCT116 در مدت زمان 24 و 48 ساعت بهترتیب 90 (1/23 میکروگرم بر میلیلیتر) و 81 میکرومولار (7/20 میکروگرم بر میلیلیتر) نشان داده است.
نتیجه گیریبا توجه به یافته های بهدست آمده، به نظر میرسد نانوذرات ساماریوم سنتز شده به کمک عصاره گیاه زنجبیل میتوانند به عنوان دارویی جدید در درمان سرطان کلورکتال در آیندهای نزدیک استفاده شوند.
کلیدواژگان: سرطان کولورکتال، نانوذرات ساماریوم، گیاه زنجبیل، شیمی سبز -
صفحات 214-225هدف
هدف از این مطالعه تخریب ژن کیناز غنی از لوسین شماره 2 LRRK2 ، مهم ترین ژن درگیر در بیماری پارکینسون با استفاده از تکنولوژی CRISPR-Cas بود.
مواد و روشهامراحل همسانه سازی قطعات راهنما در این پژوهش با استفاده از کیت کلونینگ gRNA سیستم کریسپر (شماره کاتالوگ C8324K شرکت زاور زیست آزما) انجام شد. ابتدا 4 الیگونوکلیوتید برای توالی اگزون 41 ژن LRRK2 توسط نرم افزارساخت RNA راهنمای CRISPR با عنوان CHOCHOP طراحی شدند. این دو RNA) gRNAsراهنما) در دو طرف اگزون فوق در نظر گرفته شدند. مولکول های دو رشتهای DNA بر اساس دستورالعمل استاندارد در آزمایشگاه ساخته شدند. قطعات دو رشته ای 20 جفت بازی راهنما که برای تشکیل کمپلکس Cas9-gRNA استفاده می شوند، با استفاده از آنزیم DNA لیگاز به وکتور بیانی یوکاریوتی کریسپر Px459 متصل و پلاسمیدهای نوترکیب به درون باکتری E.Coli DH5aمیزبان با روش شوک حرارتی منتقل شدند. نتایج آزمایشها به وسیله روشهای RCP و تعیین ردیف AND ارزیابی شدند.
نتایجآزمایشهای چندگانه PCR با استفاده از پلاسمیدهای نوترکیب به عنوان AND الگو و توالییابی AND، همسانه سازی قطعه های کوچک راهنما در پلاسمید بیانی کریسپر را نشان داد.
نتیجه گیرینتایج حاصل از این مطالعه نشان داد، سیستم CRISPR می تواند به عنوان یک ابزار قوی فراگیر برای ویرایش و تنظیم بسیاری از ژن های موثر در بیماریها از جمله بیماری پارکینسون استفاده شود.
کلیدواژگان: بیماری پارکینسون، ژن LRRK2، کریسپر -
صفحات 226-242هدف
هدف از این مطالعه بررسی تاثیر عصاره آبی و اتانولی گیاهان دارویی شامل چریش، میخک، آویشن و اسطوخودوس بر روی افزایش عمر انبارمانی پرتقال به وسیله کاهش اکسیژن های فعال و متعاقب آن کاهش فعالیت آنزیم های آنتی اکسیدانت است.
مواد و روش هادر این پژوهش ابتدا از چریش، میخک، آویشن و اسطوخودوس با استفاده از حلال های آبی و اتانولی عصاره گیری شد، سپس میوه های پرتقال با غلظتهای مختلف عصاره های گیاهی مذکور شامل 1000×2، 1000×4 و 1000×6، و همچنین کیتوزان و واکس، تیمار شدند. بعد از اعمال تیمار، میوه ها در سردخانه با دمای 7 درجه سانتی گراد و رطوبت 80 تا 90 درصد نگهداری شدند. میوه ها در ابتدای آزمایش و سپس هر بیست روز یک بار از انبار خارج و فعالیت آنزیم های کاتالاز و پراکسیداز و همچنین میزان بیان ژن این دو آنزیم در میوه ها اندازه گیری شدند. در بخش دیگری از این مطالعه آزمون پنل انجام گرفت
نتایجبراساس نتایج، فعالیت هر دو آنزیم کاتالاز و پراکسیداز تحت تاثیر عصاره های گیاهی قرار گرفتند. در روز صدم، میوه های تیمار شده با عصاره اسطوخودوس اتانولی با غلظت 1000×6 دارای کمترین میزان فعالیت آنزیم کاتالاز با مقدار 13/2، و کمترین میزان فعالیت آنزیم پراکسیداز مربوط به میوه های تیمار شده با غلطت 1000×6 عصاره آبی اسطوخودوس، به میزان 54/1 بودند. عصاره های آبی و الکلی اسطوخودوس برروی میزان بیان هر دو ژن کاتالاز و پراکسیداز تاثیر داشتند به نحوی که کمترین میزان بیان ژن آنزیم های کاتالاز و پراکسیداز در روز صدم، مربوط به تیمار 1000×6 عصاره اتانولی اسطوخودوس به ترتیب با مقادیر 66/6 و 28/5 بود.
نتیجه گیریبا توجه به نتایج این تحقیق مشخص شد که به طورکلی عصاره گیاهان چریش، میخک، آویشن و اسطوخودوس تاثیر بر روی فیزیولوژی میوه پرتقال داشته و با کاهش فعالیت فیزیولوژیکی باعث کاهش میزان فعالیت آنزیم ها و همچنین بیان ژن های متناظر آن ها می شوند.
کلیدواژگان: بیان ژن، پراکسیداز، پرتقال، عصاره گیاهی، کاتالاز -
صفحات 243-251هدف
هدف از این مطالعه بررسی اثر آپوپتوتیک عصاره الکلی سیاهدانه بر روی سلول های سرطانی HL-60 بود..
مواد و روشهادراین مطالعه تجربی غلظتهای 350، 650، 950 و 1250 میکروگرم/میلیلیتر عصاره الکلی سیاهدانه در محیط کشت، روی سلول های سرطانی HL-60 به مدت 24 ساعت اثر داده شد. برای بررسی درصد سلول های زنده از آزمون MTT استفاده شد. همچنین برای تعیین اینکه آیا عصاره الکلی سیاه دانه تکثیر سلولهای HL-60 را از طریق تنظیم پیشرفت چرخه سلولی و آپوپتوزیس مهار می کند، ابتدا با استفاده از رنگ آمیزی PI فلوسایتومتری انجام شد، سپس رنگ آمیزی AO/EB سلولهای HL-60 برای تشخیص الگوهای آپوپتوزیس و نکروزیس انجام شد.
نتایجآزمون MTT نشان داد که در مقایسه با گروه کنترل، عصاره الکلی سیاه دانه در غلظت 650 میکروگرم/میلیلیتر باعث مرگ 50 درصد سلول های HL-60 شد و در غلظت های بالاتر وابسته به غلظت باعث مرگ بیشتر سلول ها شد، همچنین افزایش معنی داری در سلول های فاز G0/G1 از 2/15 درصد در گروه کنترل به 65/51 درصد در گروه تیمار شده با غلظت 650 میکروگرم/میلیلیتر باعث مشاهده شد. به علاوه مشخص شد که غلظت 650 میکروگرم/میلیلیتر باعث القا آپوپتوزیس در سلولهای HL-60 شد در حالی که در غلظت های بالاتر باعث نکروزیس سلول های HL-60 نسبت به گروه کنترل شدند.
نتیجه گیریبا توجه به نتایج به دست آمده میتوان نتیجه گرفت که داروی تاموکسیفن از طریق افزایش بیان ژن CTNNBIP1 بر روی مسیر سیگنالی Wnt و پروتئین بتا کاتنین اثر مهاری دارد.
کلیدواژگان: سیاه دانه، مرگ برنامه ریزی شده، سلول های HL-60، فلوسایتومتری، رنگآمیزی AO، EB -
صفحات 252-260هدف
در این مطالعه اثرات سمیت سلولی عصاره هیدروالکلی درمنه (Artemisia sieberi) و تاثیرگذاری آن بر چرخه سلولی در رده سلولی سرطان پستان SkBr3 بررسی شد.
مواد و روشهادر این پژوهش، عصاره هیدروالکلی گیاه درمنه استخراج شد و سلولهای SkBr3 با غلظتهای مختلف عصاره (1، 10، 100و 1000 میکروگرم بر میلیلیتر) بهمدت 24 و 48 ساعت تیمار شدند. سپس توسط روش TTM و دستگاه فلوسایتومتری، به ترتیب اثر ضدسرطانی و تاثیر عصاره بر چرخه سلولی مورد سنجش قرارگرفت.
نتایجبراساس داده های به دست آمده از تست MTT بیشترین سمیت عصاره برای سلولها تعیین شد. میزان IC50 مربوط به عصاره هیدروالکلی در 24 و 48 ساعت به ترتیب برابر با 150 و 50 میکروگرم بر میلیلیتر اندازه گیری شد. از طرف دیگر، نتایج حاصل از دستگاه فلوسایتومتری نشان داد این عصاره قابلیت توقف چرخه سلولی در گروه های تیمار 24 و 48 ساعت را نیز دارد.
نتیجه گیریعصاره هیدروالکلی گیاه درمنه دارای خاصیت ضدسرطانی علیه سلولهای رده سلولی SkBr3 میباشد.
کلیدواژگان: درمنه، سرطان پستان، چرخه سلولی، عصاره هیدروالکلی
-
Evaluation of heat-shock protein A2 (HSPA2) expression in diabetic male rats after exercise trainingPages 193-201Aim
The aim of this study was to investigate the effect of aerobic exercise on HSPA2 expression in testes and sperm parameters in diabetic rats.
Material and MethodsTwo-month-old male wistar rats were randomly divided into three groups (n=10 in each group): control (C), diabetic (D) and diabetic training (DT). Diabetes was induced with a single intraperitoneal injection of streptozotocin. The DTrats were conditioned to run on a treadmill for the 8-week period. 48 hours after the last session, the testes were removed, and subjected to histological examination, semen analysis and total RNA was isolated from testes to measure by RT-qPCRHSPA2 mRNA expression level. The variance analysis test were applied to analyze the data (P<0.05).
ResultsFindings show that the D group had a decrease in sperm count (P=0.01), motility (P=0.001), as well as increase in abnormal sperm morphology (P=0.001). Furthermore, in the D group, HSPA2 expressionin testicular tissue was significantly reduced (P=0.01). Unlike the D group, in the DT group sperm count (P=0.04) and viability (P=0.02), and HSPA2 expression (P=0.03) were elevated.
ConclusionIn rat testes, diabetes down regulates HSPA2 expression, which is collectively detrimental to semen parameters. Exercise protected effectively against this detrimental effect.
Keywords: Exercise, heat-shock protein A2, infertility, Male -
Pages 202-213Aim
In the past decades, nanotechnology has received much attention in order to develop new drug delivery systems to overcome the limitations of routine drugs in the treatment of diseases. Nanotechnology offers very useful applications in the diagnosis and treatment of cancer, as nanomaterials can penetrate into body tissues at the cellular and molecular levels.
Materials and methodsIn the present study, samarium nanoparticles were synthesized by the extract of ginger using green chemistry synthesis method. The size of the synthesized nanoparticles was investigated by dynamic light scattering (DLS) technique and formation of new functional groups was investigated by FT_IR technique. The morphology of the nanoparticles was determined using FE-SEM scanning electron microscopy. Finally, the cytotoxicity and anticancer activity of samarium nanoparticles were studied against human colorectal cancer cell line of HCT116 after 24 and 48 hours incubation times using tetrazolium colorimetric assay (MTT assay).
ResultsDynamic light scattering data in agreement with Fe-SEM data revealed the formation of globular nanoparticles of 60 nm. Cell survival assay showed Ic50 values (the concentration of the compound that induces 50% death in cancer cells) of 90 (equal to 23.1 mg/ml) and 81 μM (equal to 20.7 mg/ml) of samarium nanoparticles on HCT116 cell line after 24 and 48 hours incubation times, respectively.
ConclusionIt is concluded that the newly green synthesized samarium nanoparticles with anticancer activity might be a good candidate for colon cancer therapy.
Keywords: Colorectal cancer, Samarium Nanoparticles, Ginger Plant, Green Chemistry -
Pages 214-225Aim
In this study, the alteration of the Leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) gene, as the most important gene involved in Parkinson's disease, was investigated using CRISPR-Cas editing technology.
Material and methodsCloning the guide molecules of interest was performed using of gRNA CRISPR cloning kit (Catalog No. C8324K, Zaver Zist Azema). Two sets of forward and reversed gRNA oligonucleotides for exon 41 of the LRRK2 gene were designed using the CHOPCHOP CRISPR guide gRNA designing web software. Double-stranded DNA molecules were made according to standard instructions in the laboratory. 20 base-pair DNA segments were used to generate RNA-Cas-9 enzyme complex and then ligated into the Px459 CRISPR eukaryotic expression vector using Fermentas DNA ligase enzyme. Recombinant plasmids were transformed into E. coli DH5a host competent cells using of heat shock method.
Resultsfindings by multiple PCR experiments and also DNA sequencing blast analysis showed successful cloning the segments of interest into CRISPR plasmids. Clear PCR bands were in agreement with expected values and DNA sequencing results showed 100% similarity.
ConclusionAccording to the results, development of CRISPR vector system may be used as a wide and powerful tool for editing and alteration of many encountered genes in different diseases such as Parkinson's disease.
Keywords: CRISPR, Parkinson's Disease, LRRK2 gene -
Pages 226-242Aim
Thepurpose of this study is the investigation of the effect of aqueous and ehanolic plant extracts including neem, clove, thyme and lavender on the increase storage life via decrease of reactive oxygen and the activity of antioxidant enzymes.
Material and methodsIn this study, it was extracted of the neem, clove, thyme and lavender with aqueous and ehanolic solution, then the orange fruits was treated with 2×1000, 4×1000 and 6×1000 concentration of plant extract and chitosan and vax. The treated fruits were stored in the storage with 7C and 80-90% humidity. The enzyme activity and the related genes expression was evaluated per twenty days to 100 days in the orange fruits. In the other section of study, it was done the panel test.
ResultsThe results showed the activity of catalase was affected with plant extracts. The treated orange fruits with 6×1000 concentration of ethanolic lavender extract showed the least catalase activity, with 2.13; the least peroxidase activity was observed in the fruits treated with aqueous lavender extract with 6×1000 concentration. The ethanolic and aqueous of lavender extract affected on the catalase and peroxidase gene expression with 5.28 and 6.66 respectively.
Conclusionthe results of this study showed the extracts of neem, clove, thyme and lavender have highly effect on the plant physiology and they decreased the enzyme activity and the genes expression.
Keywords: Catalase, Gene expression, Orange, Peroxidase, Plant extract -
Pages 243-251Aim
The aim of this study was to investigate the apoptotic effect of the alcoholic extract of black seed on HL-60 cancer cells.
Material and MethodsIn this study, concentrations of 350, 650, 950 and 1250 µgml-1 of Nigella sativa alcoholic extract were added to HL-60 cancer cells for 24 h. MTT assay was applied to find out the portion of living cells. Likewise, PI staining for flow cytometry was performed to determine whether black seed extract inhibits the proliferation of HL-60 cells by modulating cell cycle progression and apoptosis, then AO/EB staining of HL-60 cells was performed to detect apoptosis and necrosis patterns.
ResultsMTT assay showed that in comparison with the control group, alcoholic extract of black seed killed 50% of HL-60 cell in the concentration of 650 µgml -1and based on the concentration, more cell death was caused at the higher concentration. Also, a substantial increase in G0/G1 phase cells was observed from 15. 2% in the control group, up to 51. 65% in the group was treated with 650 µgml -1 It was also found that the concentration of 650 µgml -1 induced apoptosis in HL-60 cells, while at higher concentrations of 950 and 1250 µgml -1 caused HL-60 cells necrosis compared to the control group.
Keywords: Black seed, Apoptotic, HL-60 cells, flow cytometry, AO, EB staining -
Pages 252-260Aim
This study was performed to evaluate the cytotoxic effects of hydroalcoholic extract of Artemisia sieberi and its effect on the cell cycle in the SKBr3 breast cancer cell line.
Material and MethodsIn this study, hydroalcoholic extract of Artemisia was prepared. SKBr3 cells were exposed to different concentrations (1, 10, 100, 1000 µgml-1) of extract at two different time intervals of 24 and 48 h. We employed MTT assay and flow cytometry analysis to evaluate effects of the prepared extract on the cell cycle characteristics and its cytotoxic properties.
ResultsBased on the data obtained from the MTT test, the highest toxicity of the extract observed at the concentration of 1000 µgml-1 within 48 h after the extract exposure. The IC50 of hydroalcoholic extract was 150 and 50 µgml-1 at 24 and 48 h, respectively. According to the data obtained from flow cytometry analysis, the extract arrests cell cycle in 24 and 48 h treatment groups.
ConclusionThe hydroalcoholic extract of Artemisia at certain concentrations inhibits the growth of SKBr3 breast cancer cells by ceasing cell cycle step.
Keywords: Artemisia, Breast cancer, Cell cycle, Hydroalcoholic extract