فهرست مطالب

نشریه پژوهش هایی در کشت سلول و بافت کاریوتیک
سال دوم شماره 2 (تابستان 1400)

  • تاریخ انتشار: 1400/09/07
  • تعداد عناوین: 6
|
  • فاطمه دارابی، حلیمه حسن پور طیولا، سمیه عرب زاده* صفحات 1-7
    پیشینه مطالعه و هدف

    سرطان کولورکتال طی چند دهه گذشته یکی از شایع ترین سرطان ها بوده و پیش بینی می شود میزان بروز آن در سال های آینده افزایش یابد. از آنجا که پیشگیری از سرطان با گیاهان دارویی به عنوان یک استراتژی پژوهشی امیدوار کننده مطرح شده است، اثر عصاره هندوانه ابوجهل (Citrullus Colocynthis) و ترکیب فیکوسیانین بر رشد سلول های سرطان روده بزرگ و میزان بیان بیومارکرهای آپوپتوز شامل پروتئین های کاسپاز 3 و Bax مورد ارزیابی قرار داده گرفت.

    روش مطالعه

    سلول های سرطان کولون انسان (HT29) با غلظت های مختلف عصاره هندوانه ابوجهل و فیکوسیانین تیمار شد. سپس درصد بقای سلول ها با استفاده از روش MTT اندازه گیری شد. بیان ژن های کاسپاز 3 و Bax با روش real time PCR سنجش گردید و نتایج با استفاده از نرم افزار SPSS آنالیز شد.

    نتایج

    تفاوت معنی داری در میانگین درصد سلول های مرده در حجم های 1 تا 30 میکرولیتر از عصاره، فیکوسیانین، عصاره+فیکوسیانین پس از 24، 48 و 72 ساعت مشاهده گردید (P<0.05). ترکیب عصاره+فیکوسیانین و همچنین فیکوسیانین اثرات مهارکنندگی قویتری علیه رشد سلول های سرطانی در مقایسه با عصاره نشان دادند (P<0.05). ترکیب عصاره+فیکوسیانین سبب افزایش معنی دار 35/2 برابری و همچنین عصاره هندوانه ابوجهل نیز به تنهایی سبب افزایش 67/1 برابری بیان ژن Bax شد (P<0.05). بعلاوه، ترکیب عصاره+ فیکوسیانین و همچنین عصاره هندوانه ابوجهل به طور معنی داری موجب افزایش بیان ژن کاسپاز 3 به ترتیب) 15/2 و 75/1 برابر شدند (P<0.05).

    نتیجه گیری

    عصاره هندوانه ابوجهل همراه با فیکوسیانین با افزایش بیان ژن های Bax و کاسپاز 3 سبب القاء آپوپتوز درسلول های سرطانی شد.

    کلیدواژگان: عصاره هندوانه ابوجهل، فیکوسیانین، کاسپاز 3، BAX
  • الهه روشن زاده، عباس صاحبقدم لطفی*، ساره ارجمند صفحات 8-20
    پیشینه مطالعه و هدف

    استفاده از کشت سه بعدی به منظور افزایش دانسیته سلولی و نیز ایجاد بستری مناسب جهت رشد و تکثیر و تمایز سلول های بنیادی یکی از روش های مهم جهت کاربرد آنها در مهندسی بافت است. در این تحقیق از سلول های بنیادی مزانشیمی بافت چربی به دلیل سهولت دستیابی و مقدار فراوان آن، جهت تمایز به سلول های شبه کبدی با هدف بررسی تاثیر کشت سه بعدی بر روی داربست سه بعدی ژلاتین/لامینین استفاده شده است.

    روش مطالعه

    استخراج سلول های مزانشیمی از چربی زیر پوستی ناحیه شکمی موش C57، به روش هضم آنزیمی انجام شد. بنیادی بودن سلول های استخراج شده از طریق آنالیز فلوسایتومتری و مشاهده بیان مارکرهای اختصاصی سلول های بنیادی و عدم بیان مارکرهای اختصاصی هماتوپویتیک (CD45) و لکوسیت (CD34) بررسی شد. عدم سمیت داربست با روش MTT بررسی شد. سلول های بنیادی، بر روی سطح پلی استیرن و سطح پوشیده شده از لامینین و داربست ژلاتین/لامینین کشت داده شد و به مدت 21 روز طی دو مرحله توسط فاکتورهای رشد تیمار شد. تمایز سلول ها با روش های بیوشیمیایی اوره، ذخیره گلیکوژن بررسی شد.

    نتایج

    بیان مارکرهای اختصاصی سلول های بنیادی و عدم بیان مارکرهای CD45 و CD34 تایید شد. توان تمایزپذیری این سلول ها به سلول های چربی و استخوان به اثبات رسید.

    نتیجه گیری

    پوشش دادن داربست سه بعدی ژلاتین با لامینین باعث افزایش اثر چسبندگی سلول های بنیادی مزانشیمی بافت چربی موش شده و نیز حضور این داربست، تمایز این سلول ها را به سلول های شبه هپاتوسیت در حضور فاکتورهای رشد افزایش می دهد.

    کلیدواژگان: سلول شبه کبدی، سلول بنیادی مزانشیمی، تمایز سلول های بنیادی، داربست ژلاتین، لامینین
  • فاطمه کمالی روستا، عباس زارع میرک آبادی* صفحات 21-27
    پیشینه مطالعه و هدف

    بسیاری از مارهای خانواده کلوبریده که غیرسمی در نظر گرفته می شوند ترشحات سمی تولید می کنند که باعث ایجاد علایمی در انسان می شود. سمیت بزاق مار پلنگی (Hemorrhois ravergieri) بر روی سلول‎های فیبروبلاست پوست انسانی (HDF) انجام شد.

    روش مطالعه

    در این پژوهش به بررسی اثرات سمیت ترشحات غده دوورنوی مار پلنگی بر میزان بقا و رشد سلول های HDF با استفاده از میکروسکوپ اینورت (Inverted)، آزمون MTT و سنجش میزان آنزیم لاکتات دهیدروژناز (LDH) پرداخته شد.

    نتایج

    سنجش سمیت با آزمون MTT نشان داد بزاق مار بقای سلول های HDF در مقایسه با کنترل کاهش می دهد و با افزایش غلظت بزاق مار میزان سمیت سلولی افزایش می یابد که وابسته به غلظت است (05/0<P). همچنین میزان آزاد سازی LDH با افزایش غلظت بزاق مار افزایش یافت (05/0<P). همچنین بزاق مار پلنگی می تواند ناهنجاری های مورفولوژیکی شامل از دست دادن شکل چند وجهی و کاهش تراکم در سلول های در معرض بزاق مار ایجاد کند.

    نتیجه گیری

    تاثیر سمیت بزاق مار پلنگی بر روی سلول پوست احتمالا از طریق نکروز می باشد همچنین بزاق این مار می تواند باعث ایجاد علایم موضعی شود و افرادی که مورد گزش قرار می گیرند باید تحت مراقبت درمانی قرار گیرند.

    کلیدواژگان: سیتوتوکسیسیته، MTT، LDH، مار پلنگی، سلول های فیبروبلاست پوست انسانی (HDF)
  • مینا مفتون*، رحیم احمدی صفحات 28-34
    پیشینه مطالعه و هدف

    سرطان فیبروبلاستوما یکی از شایع ترین بدخیمی های پوستی است. مطالعات نشان می دهند که هورمون های جنسی از جمله پروژسترون، می تواند اثرات سیتوتوکسیک بر سلول های سرطانی داشته باشند. بر این اساس، مطالعه حاضر به بررسی اثرات غلظت سمی هورمون پروژسترون بر بیان ژن نیتریک اکسید سنتتاز در سلول های فیبروبلاستوما (L929) می پردازد.

    روش مطالعه

    زنده مانی سلول های L929 در مواجهه با غلظت های 10، 1، 1/0، 01/0، 001/0 و 0001/ 0میلی گرم بر میلی لیتر پروژسترون با استفاده از تست MTT مورد سنجش قرار گرفت. اثر غلظت های مختلف پروژسترون بر میزان نیتریک اکساید به روش گریس اندازه گیری شد و میزان بیان ژن نیتریک اکساید سنتاز القایی (iNOS) با استفاده از تکنیک Real time PCR انجام شد. در نهایت، داده ها با استفاده از نرم افزار SPSS و آزمون آماری ANOVA مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند.

    نتایج

    زنده مانی سلول های فیبروبلاستوما در مواجهه با غلظت های 1 و 10 میلی گرم بر میلی لیتر هورمون پروژسترون نسبت به گروه کنترل دچار کاهش معناداری گردید (P<0.001). سطح بیان نسبی ژن iNOS در سلول های تیمار شده با دوز IC50 هورمون پروژسترون نسبت به گروه کنترل دچار افزایش معناداری شد (P<0.001). میزان غلظت نسبی نیتریک اکساید در سلول های فیبروبلاستوما مواجهه شده با غلظت های 0.01 و 0.1 و 1 نسبت به کنترل دچار افزایش معنادار گردید (به ترتیب P<0.001 ، P<0.001 و P<0.05).

    نتیجه گیری

    هورمون پروژسترون دارای اثر سیتوتوکسیک بر سلول های L929 است و بخشی از این اثر به دلیل تاثیر این هورمون بر بیان ژن iNOS و افزایش آن می باشد که احتمالا سبب القای آپوپتوز در سلول های L929 شده است.

    کلیدواژگان: پروژسترون، رده سلولی L929، زنده مانی، iNOs، نیتریک اکساید
  • سحر سلمانزاده زهکش، ناصر محمدپور دونیقی* صفحات 35-42
    پیشینه مطالعه و هدف

    نانوذرات آلژینات بدلیل داشتن خواصی مانند زیست سازگاری، زیست تخریب پذیری، مخاط چسبی، غیر سمی بودن بطور گسترده ای در سیستم های جدید انتقال دارویی مورد استفاده قرار گرفته است. امروزه برای ایمنی زایی بر علیه سم مارها انواع مختلفی از ادجوانت ها مانند محلول ها، سوسپانسیون ها و امولسیون ها استفاده می شود. هدف از این مطالعه طراحی یک سیستم انتقال آنتی ژن جدید با استفاده از سم مار قفقازی (Agkistrodon halys) و نانوذرات آلژینات بود.

    روش مطالعه

    نانوذرات آلژینات به روش زوج یونی سنتز شد. از تکنیک های میکروسکوپ الکترونی روبشی (SEM)، DLS و طیف سنجی FT-IR برای بررسی شکل، اندازه، بار سطحی و ساختار نانوذرات حاوی سم مارافعی قفقازی استفاده شد. رفتار آزاد سازی سم و زنده مانی سلول های سرطانی کولون SW-480 تیمار شده با نانوذرات حاوی سم نیز مورد بررسی قرار گرفت.

    نتایج

    نانوذرات دارای شکل کروی بودند و اتصال آلژینات و کلسیم کلرید بوسیله FT-IR تایید شد. بهینه اندازه نانوذرات آلژینات و نانوذرات آلژینات حاوی سم بترتیب 118و 169 نانومتر بود. فعالیت بیولوژیکی سم بعد از فرایند ساخت نانوذرات کاملا حفظ شد. زنده مانی سلول های SW-480 تیمار شده با غلظت های بالای 20 میکرو گرم بر میلی لیتر نانوذرات حاوی سم نسبت به گروه کنترل دچار کاهش معناداری گردید (P<0.05).

    نتیجه گیری

    نتایج بدست آمده در این تحقیق نشان داد که نانوذرات آلژینات می تواند جایگزین مناسبی برای ادجوانت ها سنتی باشد.

    کلیدواژگان: نانوذرات آلژینات، سم مار افعی، ادجوانت ها، سلول های سرطانی کولون SW-480
  • محمد کرمعلی گیلانه، رحیم احمدی*، فاطمه امینی خداشهری صفحات 43-50
    پیشینه مطالعه و هدف

    مطالعات بسیاری نشان دهنده ارتباط امواج فراصوت با عملکرد سیستم تولید مثلی می باشند. در عین حال مکانیسم اثر امواج فراصوت بر هورمون های جنسی و بافت بیضه کاملا روشن نیست. بر این اساس مطالعه حاضر بررسی اثرات امواج فراصوت بر سطح سرمی هورمون های DHEA-SO4، تستوسترون و بافت سلولی بیضه در موش صحرایی نر پرداخته است.

    روش مطالعه

    موش های نر نژاد ویستار در سه گروه تقسیم شدند: گروه کنترل که در معرض امواج فراصوتی نبودند، موش هایی که یک ساعت در روز در معرض امواج فراصوت بودند، و موش هایی که شش ساعت در روز در معرض امواج فراصوت بودند. سطح سرمی تستوسترون و DHEA-SO4 به روش الایزا اندازه گیری شد. اسلایدهای بافت بیضه با استفاده از میکروسکوپ مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. داده ها با استفاده از آزمون آنالیز واریانس یک طرفه مقایسه شدند.

    نتایج

    سطح سرمی هورمون های تستوسترون و DHEA-SO4 ، تعداد سلول های اسپرماتوگونی، سلول های اسپرماتوسیت و سلول های سرتولی و مورفولوژی لوله های اسپرم ساز بافت بیضه در گروه های در معرض امواج فراصوت در مقایسه با گروه کنترل تفاوت معناداری نداشت.

    نتیجه گیری

    یافته های مطالعه نشان داد که امواج فراصوت با فرکانس پایین بر عملکرد و بافت شناسی سیستم تناسلی نر تاثیر معناداری ندارد.

    کلیدواژگان: امواج فراصوت، تستوسترون، DHEA-SO4، بافت بیضه، موش صحرایی
|
  • Fatemeh Darabi, Halimeh Hassanpour, Somayeh Arabzadeh * Pages 1-7
    Introduction and Aim

    Colorectal cancer has been one of the most common cancers over the past few decades and is expected to increase in the future. Since cancer prevention has been proposed as a promising research strategy, we have investigated the effect of Citrullus colocynthis watermelon extract and phycocyanin compound on the growth of colon cancer cells. subsequently evaluated the expression of apoptosis biomarkers including Caspase-3 and Bax proteins

    Methods

    Human colon cancer cells (HT-29) with different concentrations of Citrullus colocynthis extract and phycocyanin were cultured. The percentage of live cells and expression of Caspase-3 and Bax genes were evaluated by MTT and RT-PCR methods. Then, results were analyzed with SPSS software

    Results

    There was a significant difference in the average percentage of dead cells in volumes 2 to 30 μL from extract, phycocyanin, extract+phycocyanin after 24, 48, and 72 hours (P> 0.05). However, phycocyanin, extract+phycocyanin were more effective in the inhibition of cancer cells (P<0.05). Moreover, the combination of extract+phycocianine and also extract significantly increased Bax gene expression (2.35, 1.67 times, respectively) (P<0.01). The combination of extract+phycocyanin and Citrullus colocynthis extract significantly increased the expression of caspase-3 gene expression in the cancer cells by a factor of 2.15 and 1.75 (P <0.01).

    Conclusion

    Extract of Citrullus colocynthis, as well as the combination of extract+phycocyanin by increasing the expression of Bax and caspase-3 genes, induce apoptosis in cancerous cells.

    Keywords: Citrullus colocynthis extract, Phycocyanin, Caspase-3. Bax
  • Elaheh Roshanzadeh, Abbas Sahebghadam Lotfi *, Sareh Arjmand Pages 8-20
    Introduction and Aim

    Using 3D culture to increase cell density and creating a suitable bedrock for the growth and proliferation and differentiation of stem cells is one of the important methods for their application in tissue engineering. In this study, mesenchymal stem cells of adipose tissue because of ease of access and abundance have been used to differentiate into hepatocyte-like cells to investigate the effect of 3D cultures on gelatin/laminin 3D scaffolds.

    Methods

    Mesenchymal stem cells were extracted from subcutaneous fat of the abdominal region of C57 mice by enzymatic digestion using collagenase enzyme. The extracted stem cells were confirmed by flow cytometry analysis and observation of the expression of specific stem cells markers such as CD105, CD44, and the absence of specific leukocyte (CD34) and hematopoietic (CD45). The non-toxicity of the scaffold was also investigated by the MTT method. Stem cells were cultured on a polystyrene surface and laminin and gelatin/laminin scaffold and treated with growth factors for 21 days in two stages. Cell differentiation was investigated by biochemical methods including examination of secretion indices such as urea and glycogen storage.

    Results

    The expression of specific stem cells markers such as CD105, CD44, and the absence of CD34 and CD45 were proved. The ability to differentiate these cells into adipocytes and osteocytes has been proven.

    Conclusion

    The results show the presence of a three-dimensional gelatin/laminin scaffold increases the adhesion, proliferation, and differentiation of fatty mesenchymal cells to hepatocyte-like cells.

    Keywords: hepatocyte-like Cells, Mesenchymal Stem Cell, Stem Cell Differentiation, Gelatin, Laminin Scaffold
  • Fatemeh Kamali Rousta, Abbas Zare Mirakabadi * Pages 21-27
    Introduction and Aim

    Many colubrid snakes produce toxic oral secretions and some species have caused severe reactions in humans. In this research toxicity of Duvernoy´s gland secretion (DGS) from Hemorrhois ravergieri (aglyph) has been studied.

    Methods

    In this study, the effect of Hemorrhois ravergieri saliva on human dermal fibroblasts (HDF) cells growth was determined by the inverted microscope and MTT assay. The integrity of the cell membrane through LDH release was evaluated as well.

    Results

    The MTT assay and Neutral red assay showed a significant (p˂0.05) cytotoxic effect of Hemorrhois ravergieri salvia on HDF cells growth after 24 h treatment. Additionally, Hemorrhois ravergieri venom caused a significant increase in LDH release (p˂0.05). Numerous morphological abnormalities were observed in cells exposed to the DGS and showed loss of their common polygonal shape, appearing as several roughly rounded cells of variable size.

    Conclusion

    The Hemorrhois ravergieri saliva causes cytotoxic effects on HDF cells by the necrotic mechanism. This colubrid snake bite causes local symptoms, so this research suggests a more careful evaluation of the victims when considering the medical treatment to be adopted.

    Keywords: Cytotoxicity, MTT, LDH, Hemorrhois ravergieri, Human dermal fibroblasts (HDF)
  • Mina Maftoon *, Rahim Ahmadi Pages 28-34
    Introduction and Aim

    Fibroblastoma is a common skin malignancy and a common cause of morbidity worldwide. Studies have shown that sex steroid hormones including progesterone have cytotoxic effects on cancer cells. According to this, the present study aims to determine the effects of progesterone cytotoxic concentration on iNOs expression in fibroblastoma (L929) cells.

    Methods

    Cell viability was measured using MTT assay in cells exposed to 0.001, 0.01, 0.1, 1, and 10 mg/ml of progesterone, and IC50 dose was determined. NO concentration levels were also measured using the Griess test. The expression level of iNOS was measured by real-time RT-PCR. Data were analyzed using SPSS by one-way ANOVA.

    Results

    Viability significantly decreased in fibroblastoma cells exposed to 1 and 10 mg/ml of progesterone (P<0.001). The relative expression level of iNOS significantly increased in cells exposed to IC50 dose of progesterone (P<0.001). The relative concentration of NO significantly increased in fibroblastoma cells exposed to 0.01, 0.1, and 1 mg/ml of progesterone (P<0.001, P<0.001, and P<0.05, respectively).

    Conclusion

    Progesterone has cytotoxic effects on fibroblastoma cancer cells due partly to the effects of the hormone on iNOS expression level and increased NO that probably induces apoptosis in fibroblastoma cancer cells.

    Keywords: Progesterone, L929 cell line, Viability, iNOS, Nitric oxide
  • Sahar Salmanzadeh Zehkesh, Naser Mohammadpour Donighi * Pages 35-42
    Introduction and Aim

    Alginate nanoparticles have been used in novel drug delivery systems due to marvelous features including biocompatibility, biodegradable, mucoadhesive, and non-toxic. At present various types of adjuvants are used against snake venom, as a solution, suspension, or emulsion systems, which are used in different centers. The purpose of this study is to design a novel type of antigen delivery system as an adjuvant from alginate nanoparticles.

    Methods

    Alginate nanoparticles were prepared based on the ionic gelation process. The nanoparticles' particle size, morphology, zeta potential, in vitro release behavior, and structure of nanoparticles contained venom were analyzed by SEM, DLS, and FT-IR spectroscopy. Cell viability of SW-480 cells was measured using an MTT assay.

    Results

    The particles were spherical. The optimum particles size of alginate and venom-loaded nanoparticles were 118 and 169 nm, respectively. Viability significantly decreased in cells exposed to upper 20 µg/ml o (P<0.05).

    Conclusion

    Our results suggested that alginate nanoparticles, which were prepared in our study possibly, could be used as an alternative for traditional adjuvant systems.

    Keywords: Alginate nanoparticles, the venom of Agkistrodon halys snake, Adjuvants, colon cancer cells (SW-480)
  • Mohammad Karamali Gilaneh, Rahim Ahmadi *, Fatemeh Amini Khodashahri Pages 43-50
    Introduction

    Many studies have shown the relationship between ultrasound and the function of the reproductive system. However, the mechanism of ultrasound waves action on sex hormones and testicular tissue is not perfectly clear. Accordingly, the present study investigated the effects of ultrasound waves on serum levels of DHEA-SO4, testosterone and testicular tissue in male rats.

    Materials and Method

    Male wistar rats were divided into three groups: control group which was not exposed to ultrasound waves, rats that were exposed to ultrasound waves for 1h/day, and rats that were exposed to ultrasound waves for 6h/day. The serum levels of testosterone and DHEA-SO4 were measured using ELISA. The testicular tissue slides were prepared and analyzed microscopically.Data were analyzed using one-way ANOVA.

    Results

    Serum levels of testosterone and DHEA-SO4 and spermatogonia, spermatocytes, sertoli cell count and seminiferous tubules morphology did not significantly changed in groups exposed to ultrasound waves compared to control animals.

    Conclusion

    Our findings show that ultrasound waves do not significantly influence male reproductive system function and histology.

    Keywords: Ultrasound Waves, Testosterone, DHEA-SO4, Testis tissue, Rat