فهرست مطالب
Journal of Pathobiology Reaearch
Volume:12 Issue: 2, 2009
- تاریخ انتشار: 1388/05/11
- تعداد عناوین: 8
-
-
صفحات 1-11هدفسلول های دندریتیک برای فعال سازی و قطبی شدن سلول های T در راستای پاسخ های ایمنی اکتسابی ضروری هستند. در تحقیق حاضر، اثر رده لنفوئیدی سلول های دندریتیک بار شده با عصاره سلول های توموری شوک حرارتی دیده در مدل تومور فیبروسارکوما ارزیابی شد.مواد و روش هاموش های Balb/C، ده روز قبل از ایمن سازی با سلول های دندریتیک با تزریق رده سلولی Wehi-164 به صورت زیر پوستی مبتلا به تومور فیبروسارکوما شدند. بیان مولکول های HSP70 در سلول های توموری که شوک حرارتی دیدند با وسترن بلات بررسی شد. رده لنفوئیدی سلول های دندریتیک از طحال موش با روش بید مغناطیسی (MACS)، جداسازی و تخلیص شدند. سپس واکسن در گروه های مختلف شامل سلول های لنفوئیدی دندریتیک بار شده با عصاره سلول های توموری شوک حرارتی دیده، حرارت ندیده و بدون عصاره سلول توموری به صورت زیر پوستی تزریق شد و حجم تومور، طول عمر و آثار سیتوتوکسیک بررسی شد.نتایجنتایج نشان داد که واکسن سلول های دندریتیک لنفوئیدی بار شده با عصاره سلول های توموری شوک حرارتی دیده، سبب کاهش معنی دار حجم تومور و افزایش طول عمر در موش های ایمن شده، شد. ایمنی درمانی با سلول های دندریتیک لنفوئیدی بار شده با عصاره سلول های توموری شوک حرارتی دیده، منجر به افزایش معنی دار فعالیت سلول های T سیتوتوکسیک در بافت توموری شد.نتیجه گیرینتایج این تحقیق نشان داد که استفاده از رده لنفوئیدی سلول دندریتیک بار شده با عصاره سلول های توموری شوک حرارتی دیده می تواند باعث القای پاسخ سیتوتوکسیک ضد تومور فیبروسارکوما شده و راه کارهای جدیدی را در درمان سرطان معرفی می نماید.
کلیدواژگان: سلول دندریتیک لنفوئیدی، عصاره سلول توموری، پروتئین شوک حرارتی -
صفحات 13-28هدفاپرون virB در بروسلا ملی تنسیس، سیستم ترشحی نوع IV (T4SS) را رمز می کند که برای تکثیر درون سلولی و ایجاد عفونت در مدل موشی مورد احتیاج است. محصول دومین ژن این اپرون، VirB2 است که پیش بینی می شود مکانی را در سطح باکتری ایجاد کند تا امکان اتصال به میزبان را فراهم آورد. امروزه مطالعات روی توصیف جهش های حذفی در این ژن متمرکز شده است که انتظار می رود آثار این جهش در ژن های پایین دست این اپرون که T4SS را می سازند، نشان داده شود. در این تحقیق بررسی تاثیرات جهش virB2 بر ماندگاری و تکثیر درون سلولی باکتری در ماکروفاژهای J774 و موش های BALB/c و میزان ایمنی زایی آن بررسی شده است.مواد و روش هابرای این که لزوم حضور VirB2 در ساختار و عملکرد T4SS مشخص شود، ابتدا با کلون سازی، ساختاری که در آن جهش حذفی virB2 ایجاد شده و ژن مقاومت به کانامیسین جایگزین آن شده بود، ساخته شد. برای نشان دادن تکثیر درون سلولی باکتری، ماکروفاژهای J774 و موش های BALB/c با بروسلا ملی تنسیس سویه وحشی و جهش یافته آلوده شدند، همچنین ترشح IgG، اینترلوکین 12 و اینترفرون گاما در مدل موشی بررسی شد.نتایجبعد از 48 ساعت، تعداد بروسلاهای جهش یافته نسبت به سویه وحشی در ماکروفاژهای J774 به شدت کاهش یافت و بروسلاهای جهش یافته virB2 از CFU 106×1 در طحال به کمتر از CFU 1000 در طحال در طی 8 هفته رسید. همچنین IgG کل طی همین مدت در موش های هر دو گروه افزایش یافت، اما اینترلوکین 12 و اینترفرون گاما فقط در موش های آلوده به سویه وحشی باکتری افزایش یافت.نتیجه گیریحضور ژن virB2 برای تکثیر درون سلولی در ماکروفاژهای J774 ضروری است، باکتری های جهش یافته در ژن virB2 قادر به ایجاد عفونت پایدار در مدل موشی نیستند. بنابراین نقش ضروری VirB2 در ساختار T4SS در هنگام عفونت زایی و ترشح اینترلوکین 12 و اینترفرون گاما نشان داده شد. اما حضور یا عدم حضور این ژن تاثیری در تولید IgG کل ندارد.
کلیدواژگان: ایمنی زایی، بروسلا ملی تنسیس، تکثیر درون سلولی، جهش virB2، T4SS -
صفحات 29-35هدفورود توکسوپلاسما گوندیی به خون و سایر بافت های بدن (مانند کبد، عضلات، قلب و...) و تکثیر آن در تمام سلول های هسته دار ممکن است باعث آسیب های بافتی و در نتیجه بروز برخی تغییرات در سطح آنزیم های سرمی شود.
در این مطالعه میزان تغییرات سطح آنزیم های سرمی AST، ALT، ALK/P، CPK، LDH و ACP رت هایی که به طور تجربی به توکسوپلاسما گوندیی آلوده شده اند، بررسی شد.مواد و روش هابدین منظور تعداد 116 سر رت عاری از آلودگی را به دو گروه 87 سر رت مورد و 29 سر رت شاهد تقسیم شدند. گروه مورد با تزریق 50000 عدد تاکی زوئیت از طریق داخل صفاقی آلوده شدند. در سه روز اول هر 8 ساعت یک بار و سپس هر سه روز یک بار تا مدت 60 روز هر بار از یک گروه مورد به همراه شاهد آن نمونه برداری و میزان تغییرات سطح آنزیم های مذکور بررسی شد.نتایجطبق نتایج به دست آمده، آنزیم AST طی 8 ساعت اول و ساعات 32-40 و 48-56، آنزیم ALT طی 8 ساعت اول و ساعات 24-40 و 48-64، آنزیم ALK/P طی ساعات 24-40 و 48-64، آنزیم های CPK و LDH طی ساعات 24-40 و 48-56 و آنزیم ACP طی ساعات 16-48 افزایش داشتند، ولی پس از آن همگی به حالت طبیعی برگشتند.نتیجه گیریتغییرات سطح آنزیم های سرمی رت ها در خلال آلودگی به توکسوپلاسما کاملا موقتی است.
کلیدواژگان: آنزیم های سرمی، توکسوپلاسما گوندیی، رت -
صفحات 37-49هدفاستفاده غذایی و پزشکی خیار دریایی دارای قدمت بالایی است. آثار ضد باکتریایی، ضد قارچی، آنتی اکسیدانی و ضد توموری آن در مطالعات نشان داده شده است.
هدف از این مطالعه بررسی اثر ضد باکتریایی چهار عصاره به دست آمده از خیار دریایی Holoturia. SP جمع آوری شده از سواحل جزیره هنگام در خلیج فارس است.مواد و روش هاعصاره های متانولی، هگزانی، آبی و کلروفرمی از بافت دیواره بدن خیار دریایی استخراج شد که آثار ضد باکتریایی این عصاره ها بر سه سویه TG1، K12 و TOP 10 F′ از باکتری های اشرشیاکلی با استفاده از دو روش سنجش باکتریایی انتشار دیسک و ریزرقیق سازی محیط کشت آزمایش شد.نتایجمهار رشد در تمامی سویه های بررسی شده در غلظت های 78/0 تا 100 میلی گرم در میلی لیتر از عصاره های متانولی، هگزانی و کلروفرمی نشان داده شد. از میان این عصاره ها تنها عصاره متانولی و کلروفرمی در غلظت 100 میلی گرم در میلی لیتر به ترتیب باعث مرگ سویه های باکتریایی K12 و TG1 شدند. عصاره آبی نیز در هر سه سویه دارای اثر القاکنندگی بر رشد باکتری بوده است.نتیجه گیرینتایج نشان داد که خیار دریایی را می توان به عنوان یک منبع از ترکیباتی با توان ضد باکتریایی معرفی نمود که این ترکیبات می توانند کاندیدای مناسبی برای ساخت ترکیبات دارویی-پزشکی و آنتی بیوتیک ها باشند.
کلیدواژگان: انتشار دیسک، خیار دریایی، ریزرقیق سازی محیط کشت، ضد باکتریایی -
صفحات 51-59هدفدر این مطالعه کارآیی روش مولکولی PCR-RFLP و PCR اختصاص به گونه به عنوان روش های نوین و سریع برای تعیین آلودگی نمونه های خون آلوده به بورلیا پرسیکا و بورلیا میکروتی عوامل تب راجعه بررسی شد.مواد و روش هاDNA بورلیا از خون حاوی بورلیا پرسیکا و بورلیا میکروتی با پارازیتمی بالا استخراج شد و به کمک آغازگرهای اختصاصی مناطق حفاظت شده دو ژن مختلف GlpQ و 16S rDNA تکثیر و تعیین توالی شد؛ سپس برای افتراق بین دو گونه نقشه فیزیکی و محل برش آنزیمی روی مولکول DNA هر گونه تعیین و نشانگرهای مولکولی مورد نظر شناسایی شد. سپس کارایی آنزیم های برش دهنده انتخابی در واکنش های PCR-RFLP برای تفکیک و شناسایی دو گونه از همدیگر بررسی شدند. همچنین با توجه به اختلافات موجود در توالی ژن GlpQ آغازگرهای اختصاص به گونه برای تشخیص دو گونه طراحی و آزمایش شدند.نتایجنتایج مطالعه نشان داد که روش PCR می تواند آلودگی را به خوبی در نمونه های خون آلوده مشخص نماید. به دنبال PCR، آنزیم های DraI، HinfI، EcoRI، SspI، TaqI برای ژن GlpQ و آنزیم TaqI برای ژن 16S rDNA قادرند دو گونه بورلیا پرسیکا و بورلیا میکروتی را از هم تفکیک نمایند. همچنین با آغازگرهای اختصاصی ژن GlpQ، جفت آغازگر 795r و BMGLPF محصول PCR اختصاصی برای بورلیا میکروتی به طول 451 جفت باز و جفت آغازگر 128f و BPGLPR محصول اختصاصی برای بورلیا پرسیکا به طول 252 جفت باز تولید می کنند که تشخیص دو گونه را امکان پذیر می سازد.نتیجه گیریدر این مطالعه روش PCR-RFLP و PCR با آغازگرهای اختصاصی برای نخستین بار برای تمایز دو گونه بورلیا میکروتی و بورلیا پرسیکا استفاده شد. آغازگرهای اختصاصی (BMGLPF/R) این مطالعه و PCR-RFLP بسیار خوب عمل نموده و با توجه به سرعت و دقت بالای آن ها می توانند جایگزین روش کلاسیک و وقت گیر تعیین آلودگی و تشخیص این دو گونه شوند و برای استفاده در آزمایشگاه های تشخیص طبی ایران و سایر مناطق آلوده در خاورمیانه توصیه شود.
کلیدواژگان: ایران، بورلیا میکروتی، بورلیا پرسیکا، PCR با آغازگر اختصاص به گونه، PCR به همراه آنزیم های هضم کننده -
صفحات 61-71هدفبیماری دیابت قندی با افزایش رخداد بیماری های قلبی- عروقی همراه است. شواهدی مبنی بر اثر ضد دیابتی و بهبود دهندگی عملکرد سیستم قلب و گردش خون در مورد زالزالک وجود دارد، بنابراین در این تحقیق اثر مصرف خوراکی و وابسته به اندوتلیوم سرشاخه این گیاه به مدت 6 هفته بر پاسخ انقباضی و رفع انقباضی آئورت سینه ای ایزوله در مدل تجربی دیابت در موش صحرایی نر بررسی شد.مواد و روش هاموش های صحرایی نر به پنج گروه کنترل، کنترل تحت تیمار با گیاه، دیابتی، دیابتی تحت درمان با گیاه و دیابتی تحت درمان با گلیبن کلامید تقسیم شدند. دو گروه تحت تیمار با گیاه نیز پودر سرشاخه این گیاه که با غذای استاندارد موش مخلوط شده بود را با نسبت وزنی 25/6 درصد دریافت نمودند. میزان وزن و گلوکز قبل از کار و در هفته های 3 و 6 پس از کار تعیین شد. در انتها، پاسخ انقباضی حلقه های آئورت سینه ای به کلرور پتاسیم و فنیل افرین و رفع انقباضی به استیل کولین و سدیم نیتروپروسید با استفاده از بساط بافت ایزوله ارزیابی شد.نتایجمیزان گلوکز سرم در گروه دیابتی تحت تیمار به طور معنی دار کمتر از گروه دیابتی بود (01/0P<). به علاوه، حداکثر پاسخ انقباضی آئورت سینه ای دارای اندوتلیوم در گروه دیابتی تحت درمان با گیاه به کلرور پتاسیم و فنیل افرین به ترتیب به طور غیرمعنی دار و معنی دار (05/0P<) کمتر از گروه دیابتی بود و با حذف اندوتلیوم این تفاوت معنی دار از بین رفت. به علاوه، پاسخ رفع انقباضی حلقه های آئورتی دارای اندوتلیوم به استیل کولین در گروه دیابتی تحت درمان با گیاه در مقایسه با گروه دیابتی تیمار نشده بیشتر و معنی دار بود (05/0P<). در ضمن، هیچ تفاوت معنی دار بین گروه ها از نظر پاسخ رفع انقباضی به سدیم نیتروپروسید مشاهده نشد.نتیجه گیریتجویز خوراکی و دراز مدت زالزالک از طریق اثرگذاری بر عوامل مرتبط با اندوتلیوم موجب کاهش پاسخ انقباضی و افزایش پاسخ رفع انقباضی در بافت آئورت موش صحرایی دیابتی می شود که این مطلب می تواند در جلوگیری از عوارض عروقی دیابت در دراز مدت سودمند باشد.
کلیدواژگان: آئورت، اندوتلیوم، دیابت قندی، زالزالک، پاسخ انقباضی -
صفحات 73-82هدفبزرگترین چالش در ژن درمانی سرطان دستیابی به بالاترین درجه اختصاصیت و کارایی در هدف گیری سلول های سرطانی است. به دلیل این که هدف ژن درمانی سرطان ریشه کن کردن سلول های سرطانی است و بسیاری از ژن های درمانی اگر در سلول های طبیعی بیان شوند، می توانند مضر باشند. استفاده از پروموتر ژن هایی که به طور اختصاصی در سلول های سرطانی بیان می شوند یا نسبت به سلول های طبیعی بیان بسیار بالاتری دارند، در ژن درمانی سرطان بسیار مورد توجه قرار گرفته است. در این تحقیق استفاده از یک پروموتر خاص سرطان با بیان بالا بررسی شد.مواد و روش هادر راستای تکثیر و به کارگیری پروموتر خاص سرطان به منظور ایجاد یک سازه برای مقاصد ژن درمانی، با استفاده از Nested-PCR پروموتری از ژنوم انسانی جداسازی شد که در حدود 34 درصد به پروموتر سوروایوین شباهت داشت. سوروایوین یکی از اعضای خانواده ژن های ضد مرگ برنامه ریزی شده سلولی است و در بیشتر سرطان های سینه افزایش بیان آن مشاهده شده است. این قطعه ژنی براساس بررسی های انجام شده در سایت های Promoter Scan، EPD، Transfac، Compel و TRRD دارای دو جایگاه اتصال رونویسی مشابه با پروموتر سوروایوین بود که به وسیله عوامل رونویسی E2F و STAT1 شناسایی می شد. این پروموتر به همراه بخش های پاسخ دهنده به شرایط محیطی هیپوکسی و استروژن (ریزمحیط سلول های سرطانی سینه) و ژن پیش آپوپتوزی tBid در ناقل pCDNA3.1/Hygro+ کلون شد.نتایجنتایج RT-PCR نیمه کمی سلول های سرطانی ترانسفکت شده نشان می دهد که این قطعه ژنی (شبه پروموتر سوروایوین) دارای توانایی تقریبا برابر پروموتر CMV برای بیان ژن tBid است.نتیجه گیریاستفاده از یک پروموتر کایمریک در هدایت یک ژن پیش آپوپتوزی برای از بین بردن سلول های سرطانی ابزاری بسیار امیدوار کننده در راستای درمان سرطان است که با القای اختصاصی مرگ برنامه ریزی شده در این سلول ها به شکلی طبیعی باعث انهدام این سلول ها می شود. سازه حاصل در مقایسه با دو سازه کنترل، توانایی بالایی در بیان ژن پیش آپوپتوزی از خود نشان می دهد.
کلیدواژگان: رونویسی هدف مند، پروموتر سوروایوین، ژن پیش آپوپتوزی -
صفحات 83-92هدفباکتری اشرشیاکلی O157: H7، از زیرگروه اشرشیاکلی های خونریزی دهنده داخلی (انتروهموراژیک اشرشیاکلی) است. این باکتری تولید کننده توکسینی شبیه شیگا توکسین است که در ایجاد اسهال های خونی، غیرخونی و نشانگان یورمی همولیتیک نقش دارد. نشانگان یورمی همولیتیک یک عامل مهم ناتوانی کلیوی در کودکان و بزرگسالان است. ژن fepA از باکتری اشرشیاکلی O157:H7 با 2241 جفت باز، پروتئین غشایی به نام پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین را کد می کند که برای جذب فریک انتروباکتین در باکتری اشرشیاکلی ضروری است. در صورت ممانعت از جذب آهن توسط باکتری، می توان میزبان را از تهاجم آن ایمن نمود. در این مطالعه تاثیر ایمنی زایی پروتئین غشایی FepA بررسی شد.مواد و روش هابه منظور تهیه پروتئین نوترکیب FepA، پس از کشت باکتری اشرشیاکلی O157:H7، ژنوم آن به روش لیز قلیایی تخلیص شد. با کمک واکنش زنجیره پلیمراز ژن fepA از اشرشیاکلی به طول 2241 جفت باز فراوان سازی و سپس روی ناقل بیانی pET28a(+) کلون شد. پس از انتقال سازه نوترکیب به میزبان اشرشیاکلی سویه Bl21DE3، بیان پروتئین مورد نظر توسط غلظت های مختلف ایزوپروپیل تیو بتا- دی گالاکتوزید القا و بهینه سازی شد. نتایج بیان با SDS-PAGE بررسی و پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبی با کمک ستون Ni-NTA تخلیص شد. در نهایت پس از تزریق پروتئین تخلیص شده به موش و تکمیل دوره ایمن سازی، تیتر آنتی بادی با سنجش الایزا ارزیابی شد.نتایجپروتئین نوترکیب با وزن 85 کیلودالتون تولید و تخلیص شد. تزریق پروتئین به موش های Balb/C نشان دهنده توان بالای آن در تحریک سیستم ایمنی و تولید آنتی بادی و نیز توان آنتی بادی تولید شده در شناسایی پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین که منجر به تقویت مقاومت موش در برابر LD50 106 است.نتیجه گیریبا توجه به توان بالای آنتی بادی نوترکیب در شناسایی پروتئین اتصالی فریک انتروباکتین، امکان استفاده از این آنتی بادی در محدود کردن رشد و توسعه انتروباکتریاسه مطرح می شود.
کلیدواژگان: FepA، آهن، اشرشیاکلی O157: H7
-
Pages 1-11ObjectiveDendritic cells (DCs) are essential for the activation and polarization of T cells during an adaptive immune response. In this research we investigated the effect of the Lymphoide DCs pulsed with heat-treated tumor lysate (HTL) as a vaccine in tumor immunotherapy.Materials And MethodsThe Balb/c mice were injected subcutaneously in the right flank with Wehi-164 fibrosarcoma cells 10 days before immunization with the DCs. Then hsp70 expression in the HTL was detected by using western blot analysis. The mice Lymphoide DCs subset were isolated by magnetic cell sorting (MACS), Then the HTL pulsed Lymphoide DCs, TL pulsed Lymphoide DCs and unpulsed Lymphoide DCs were subcutaneously injected. Tumor growth rate, survival, cytotoxic assay measured.ResultsThe results showed that HTL-Lymphoide DCs vaccine significantly induced the tumor growth suppression and longer survival than the other immunized mice. Immunotherapy with HTL-Lymphoide DCs led to a significant increase in the activity of cytotoxic T cells in the tumor tissue.ConclusionThe current study suggests that specific anti-tumor immune responses against the fibrosarcoma can be induced by HTL-Lymphoide DCs and may provide a useful therapeutic approach for cancer treatment.
-
Pages 13-28ObjectiveThe Brucella melitensis virB operon, encoding a type IV secretion system (T4SS), is required for intracellular replication and persistent infection in the mouse model. The product of the second gene of the virB operon, virB2, is predicted to be localized at the bacterial surface, where they could potentially interact with host cells. Studies to date have focused on characterization of transposon mutations in this gene, which is expected to exert polar effects on downstream genes. We researched on the evaluation of relation between virB2 mutant with immunogenicity in mouse model and intracellular replication in macrophages J774.Materials And MethodsIn order to determine whether VirB2 is required for the function of the T4SS apparatus, we constructed and characterized deletion mutation of virB2 and kanamycin resistance gene replaced instead of virB2. For demonstration of intracellular replication, macrophages J774 and BALB/c mices were infected with wild type Brucella melitensis and mutated.ResultsAfter 48 h, number of mutated Brucella severe decreased severly compaired to wild type in macrophages J774, and Brucella with virB2 deletion decreased from 1×106 CFU/spleen less than 1000 CFU/spleen during 8 weeks, also total IgG increased in both but IL-12 and IFN-γ increased only in wild type.ConclusionVirB2 was essential for intracellular replication in mouse models and J774 macrophages. The virB2 mutant was unable to cause persistent infection in the mouse model, demonstrating the essential role of VirB2 in the function of the T4SS apparatus
-
Pages 29-35ObjectiveThe entry of Toxoplasma gondii into the bloodstream and other tissues (such as liver, muscle, cardiac muscle, …) of intermediate hosts and its multiplication in nucleated cells may cause changes in plasma levels of various enzymes due to tissue damage. In present study the serum levels of AST, ALT, ALK/P, CPK, LDH, and ACP in rats infected experimentally with Toxoplasma gondii have been investigated.Materials And MethodsTotally, 116 uninfected rats were divided into 87 as case group and 29 as control group. The case group was infected intraperitoneally with 50000 tachyzoites. Blood specimens were taken from cases and its control once every 8 hours in the first three days and then once every three days for a period of 60 days and serum levels were measured for the mentioned enzymes.ResultsDuring the study, the following changes were observed: AST in the first 8 hours, from the 32th hour till the 40th hour and from the 48th hour till the 56th hour; ALT in the first 8 hours and from the 48th hour till the 56th hour; ALK/P from the 24th hour till the 40th hour and from the 48th hour till the 64th hour; CPK and LDH from the 24th hour till the 40th hour and from the 48th hour till 56th hour; ACP from the 16th hour till the 48th hour. But afterward, whole offer mentioned enzyme shifted to normal levels.ConclusionAlteration in serum enzyme levels of rats during infection with Toxoplasma gondii found is not permanent.
-
Pages 37-49ObjectiveSea cucumber is a traditional food and medical item and has been reported to exhibit Antioxidant, antifungal, anti tumoral and antibacterial bioactivity. The objective of this study is to describe the antibacterial activity of 4 extracts of Holoturia. Sp (sea cucumber), collected from Hengam Island of Persian Gulf.Materials And MethodsMethanol, hexane, aqueous and chloroform extracts from body wall tissue of the sea cucumber were screened for antibacterial activity against three strains of Escherichia coli Top 10 F´, TG1 and K12 using disc diffusion and broth microdilution tests methods.ResultThe growth of all these strains were inhibited using concentration from 0.78 to 100 mg/ml of methanol, hexan and chloroform extracts. Among the extracts just methanol and chloroform with 100 mg/ml had bactericidal effect on TG1 and K12 strains. On the other hand, Aqueous extract had induced growth in of the all strains.ConclusionThe results suggest the possibility of applying sea cucumber as source of potential anti bacterial agents, whose compounds can be good candidates to make antibiotic products.
-
Pages 61-71ObjectiveUtility of PCR-RFLP and species-specific PCR as novel and fast methods for identification and discrimination of causative agents of relapsing fever, Borrelia persica and B. microtii in infected blood were investigated.Materials And MethodsGenomic DNA of B.persica and B.microtii species were extracted from the highly infected blood samples. Two fragments of GlpQ and 16SrDNA genes were amplified using specific primers and then the PCR products were sequenced. Based on sequence variation between the two species, species-specific primers as well as restriction enzymes were respectively designed and selected for discrimination of these species.ResultsThe results showed that using PCR technique we could easily amplify and detect the Borrelia species within the infected blood samples. Two different profiles of RFLP were produced when GlpQ PCR products of B.persica and B.microtii treated by SspI, TaqI, DraI, HinfI, and EcoRV restriction enzymes. Also when 16SrDNA was digested with TaqI enzyme we could discriminate between these two species. Based on GlpQ sequence variation, a set of primer 795r-BMGLPF produced specific band of 451 bp for B.microtii and a set of primer 128f-BPGLPR produced specific band of 252 bp for B.persica which could discriminate the both species well.ConclusionIn this study the discrimination of the two species of B.persica and B.microtii was investigated by PCR-RFLP and species-specific PCR methods for the first time. Both methods could easily distinguish the species from each other. Due to accuracy and speed of the molecular methods, they could be replaced with the classic methods. These fast and accurate diagnostic methods could be recommended for diagnosis laboratories in Iran and middle-east countries where both B.persica and B.microtii are prevalent.
-
Pages 73-82ObjectiveThe greatest challenge in cancer gene therapy is to achieve the high specificity and efficiency in targeting of cancer cells. Because the goal of cancer gene therapy is to eradicate cancer cells, many therapeutic genes could be detrimental if unintentionally expressed in normal cells. Using promoter of the genes which are expressed specifically in cancer cells or have much more expression in cancer cells than normal cells, is very noticeable tool in cancer gene therapy (CGT). In this study we were searching for cancer specific promoter which could highly express therapeutic gene.Materials And MethodsIn order to apply a cancer specific promoter for creating a CGT construct, a promoter which have 34% similarity to Survivin core promoter was amplified from human genome by using Nested-PCR. Survivin is a member of anti-apoptotic gene and its over-expression was observed in up to 70% of breast cancers. This gene fragment contains two transcriptional binding sites which were similar to Survivin promoter according to the evaluation of Promoter Scan, EPD, Transfac, Compel and TRRD program. These binding sites were recognized by STAT1 and E2F transcription factors. This promoter was cloned into pCDNA3.1/Hygro+ plasmid in along with hypoxia and estrogen modules and pro-apoptotic gene tBid.ResultsSemi-quantitative RT-PCR results of transfected cancer cells showed that this gene fragment (Survivin like promoter) have relatively same potential as CMV promoter to direct tBid gene expression.ConclusionUtilization of chimeric promoter containing Survivin like promoter could be a promising tool in killing cancer cells naturally by inducing apoptosis. This construct is highly effective in transcriptional targeting of tBid in comparison to control construct.
-
Pages 83-92ObjectiveEscherichia coli O157:H7 is a gram-negative rod-shaped bacterium. E coli O157:H7 is an enterohemorrhagic (EHEC) strain of the bacterium Escherichia coli and a cause of foodborne illness. Infection often leads to bloody diarrhea by producing a toxin called Shiga toxin, which damages the intestines, and occasionally leads to kidney failure, especially in young children and elderly people. A 2241 bp fepA gene of E.coli O157:H7 codes for production of a ferric enterobactin binding membrane protein that is essential for iron uptake by the bacterium. Inhibition of iron uptake can protect invasion of host by the bacterium. In this study we attempted to evaluate immunogenicity of the membrane protein, FepA.Materials And MethodsIn order to produce recombinant FepA protein, the genomic, fepA gene of 2241 bp long was amplified by PCR from E coli O157:H7. The PCR product was ligated to pET28a. The recombinant protein was then expressed in E. coli BL21DE3 by IPTG induction. SDS-PAGE analysis was carried out and the recombinant protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography. The purified recombinant protein was injected to Balb/C mice in order to induce immunity. Antibody titer was determined by ELISA.ResultsThe recombinant protein of 85 KD was produced and purified. Immunogenicity of the recombinant protein was determined by injecting Balb/C mice. The antibody produced therein could efficiently recognize and bind ferric enterobactin binding protein, thus heaving mice tolerance of 106LD50.ConclusionWith a view to the significant recognition by the antibody of ferric enterobactin binding protein, the notion of its application in restriction of enterobacteriacea propagation could be feasible.
©2000-2024 magiran.com All Rights Reserved.