فهرست مطالب

Journal of Pathobiology Reaearch
Volume:14 Issue: 1, 2011

  • تاریخ انتشار: 1390/02/07
  • تعداد عناوین: 8
|
  • مهدی الله بخشیان فارسانی، ناصر امیری زاده، مهدی فروزنده، مسعود سلیمانی، علی اکبر پورفتح الله صفحه 1
    هدف
    امروزه سلول های بنیادی خون ساز بند ناف به یکی از مهم ترین منابع سلول های بنیادی خون ساز تبدیل شده اند، اما متاسفانه تعداد محدود آن ها در واحدهای خون بند ناف استفاده از آن ها را در موارد پیوند مغز استخوان بزرگسالان محدود نموده است. یکی از روش های در نظر گرفته شده برای غلبه بر این مشکل، ازدیاد سلول های بنیادی خون ساز با استفاده از افزایش فعالیت خود تجدید شوندگی آن ها در محیط کشت است. چنین به نظر می رسد که مسیر TGF-b یکی از عوامل مهم مهاری فعالیت خود تجدید شوندگی سلول های بنیادی خون ساز است. در این مطالعه سعی شده است تا با مهار علامت دهی مسیر TGF-b میزان تکثیر خود تجدید شوندگی سلول های بنیادی و در نتیجه ازدیاد آن ها را ارتقا یابد.
    مواد و روش ها
    سلول های بنیادی خون ساز بند ناف CD34+ با استفاده از ستون های MACS از واحدهای خون بند ناف جدا شدند. سلول های جداسازی شده به وسیله SiRNA بر علیه TGFbR2 ترانسفکت شده و طی کشت میزان سرکوب بیان ژن گیرنده نوع دو TGF-b (TGFbR2) با استفاده از Real-Time PCR کمی بررسی شد و پس از اتمام دوره کشت از نظر نشانگر سطحی CD34 با استفاده از فلوسایتومتری و از نظر عملکردی با استفاده از LT-CIC و آزمون کلونی زایی ارزیابی شدند.
    نتایج
    براساس نتایج بررسی حاضر مهار بیان ژن TGFbR2 موجب افزایش جمعیت سلول های خون ساز CD34+ می شود. از سوی دیگر ارزیابی های LT-CIC و آزمون کلونی زایی افزایش تعداد سلول های بنیادی خون ساز اولیه را تایید می نماید.
    نتیجه گیری
    به نظر می رسد به همان اندازه ای که حضور عوامل محرک فعالیت خود تجدید شوندگی در موفقیت ازدیاد سلول های بنیادی خون ساز بند ناف اهمیت دارد، مهار عوامل مهاری هم دارای اهمیت است و مهار علامت دهی مسیر TGF-b به عنوان یکی از عوامل مهاری کلیدی می تواند به موفقیت ازدیاد سلول های بنیادی خون ساز بند ناف در محیط آزمایشگاه کمک شایانی نماید.
    کلیدواژگان: سلول های بنیادی خون ساز بند ناف، TGFbR2، SiRNA
  • زهرا اسلامی راد، عبدالحسین دلیمی اصل، فاطمه غفاری فر، زهره شریفی صفحه 17
    هدف
    توکسوپلاسموزیس یک بیماری انگلی شایع در سراسر دنیا است که می تواند منجر به عوارض شدید در انسان و حیوان شود. تاکنون انواع مختلفی از DNA واکسن ها که حاوی یک یا چند آنتی ژن این انگل بوده علیه آن مورد آزمایش قرار گرفته است که برخی از آن ها مقاومت نسبی ایجاد نمودند. در این مطالعه DNA واکسن حاوی ژن راپتری پروتئین 1 توکسوپلاسما گوندیی به همراه آلومینیم فسفات و آلوم به عنوان آدجوانت معدنی استفاده شد و تاثیر آن مقایسه شد.
    مواد و روش ها
    گروه های مختلف موش های BALB/c به تنهایی با پلاسمید بیانی حاوی راپتری پروتئین 1 (pcROP1) یا همراه با آلومینیم فسفات و آلوم ایمنی زایی شده و سپس شاخص های ایمنولوژیک شامل تکثیر لنفوسیت های طحالی، سایتوکین ها، آنتی بادی ها و میزان بقا در این موش ها اندازه گیری و مقایسه شد.
    نتایج
    در گروهی که DNA واکسن حاوی راپتری پروتئین 1 توکسوپلاسما همراه با آلوم تجویز شده بود، پاسخ ایمنی هومورال و سلولی (نوع Th1) قوی تر از گروهی بود که همین DNA واکسن را همراه با آلومینیم فسفات دریافت کرده بود. ولی در گروهی که DNA واکسن حاوی راپتری پروتئین 1 توکسوپلاسما به تنهایی تجویز شده بود، پاسخ های ایمنی از هر دو گروه مذکور بالاتر بود.
    بعد از چالش موش ها، میزان بقا در گروه هایی که DNA واکسن مذکور را همراه با آلوم یا به تنهایی دریافت نموده بودند به طور معنی دار افزایش یافت ولی میزان بقا در گروهی که همین DNA واکسن را همراه با آلومینیم فسفات دریافت نموده بود، افزایش چشمگیری نشان نداد (05/0P≤)
    نتیجه گیری
    نتایج بررسی حاضر نشان داد که آلوم و آلومینیم فسفات توانایی بالقوه برای افزایش تاثیر DNA واکسن حاوی ژن راپتری پروتئین 1 توکسوپلاسما گونده ای را ندارد.
    کلیدواژگان: آلوم، آلومینیم فسفات، DNA واکسن، ژن راپتری پروتئین 1، توکسوپلاسما گوندیی
  • فرنوش حقیقی، شهلا رودبار محمدی، ندا سلیمانی، مرتضی ستاری صفحه 29
    هدف
    افزایش روز افزون مقاومت های اکتسابی گونه های کاندیدا نسبت به داروهای ضد قارچی لزوم استفاده از ترکیبات دارای خاصیت ضد قارچی را اجتناب ناپذیر ساخته است. برخی از گیاهان به لحاظ دارا بودن ترکیباتی مانند پلی فنل ها و... دارای خواص ضد میکروبی هستند. در این مطالعه اثرضد قارچی اسانس های آویشن باغی، جعفری، زیره سبز و زیره سیاه بر سویه استاندارد کاندیدا آلبیکنس بررسی شد.
    مواد و روش ها
    25 گرم از برگ گیاه آویشن باغی، جعفری و بذر گیاه زیره سبز و زیره سیاه خشک و آسیاب شد و به وسیله دستگاه کلونجر اسانس آن ها تهیه شد. رقت های سریالی از هر یک از اسانس ها در میکروپلیت های 96 خانه ای تهیه شد. حداقل غلظت مهار کنندگی و قطر هاله مهاری به ترتیب با دو روش رقت سازی در محیط کشت مایع و دیسک گذاری در آگار ارزیابی شد و حداقل غلظت مهار کنندگی 50، 90 و حداقل غلظت کشندگی تعیین شد.
    نتایج
    حداقل غلظت مهار کنندگی 90 اسانس های آویشن باغی، جعفری، زیره سبز و زیره سیاه به ترتیب 25، 72، 412، 130 میکروگرم در میلی لیتر و حداقل غلظت کشندگی 146، 620، 280 48 میکروگرم در میلی لیتر و قطر هاله مهاری نیز به ترتیب 15، 12، 20، 28 میلی متر تعیین شد.
    نتیجه گیری
    در این بررسی اسانس های آویشن باغی، جعفری، زیره سبز و زیره سیاه آثار ضد قارچی مناسبی علیه سویه استاندارد کاندیدا آلبیکنس از خود نشان داد. در نتیجه این اسانس های گیاهی پس از انجام مطالعات تکمیل تر می تواند جایگزین های مناسبی برای داروهای شیمیایی برای درمان عفونت های کاندیدایی به ویژه کاندیدیازیس جلدی مخاطی باشد.
    کلیدواژگان: آثار ضد قارچی، اسانس های گیاهی، کاندیدا آلبیکنس، فلوکونازول
  • مهدی داداش پور، ایرج رسولی، رحیم سروری زنجانی، فاطمه سفید کن، مسعود تقی زاده، شکیبا درویش علیپور آستانه صفحه 37
    هدف
    با وجود اثر سمی برخی از روغن های اسانسی، استفاده آن ها تحت کنترل نیست. با توجه به گسترش مصرف فرآورده های گیاهی، ابعاد مختلف زیست شناختی اسانس آویشن دنایی برای اولین بار گزارش می شود.
    مواد و روش ها
    فعالیت ضد باکتریایی با دو روش انتشار و رقت، رادیکال زدایی نیتریک اکساید با روش مارکوکسی و همکاران و سمیت سلولی با روش احیا دی متیل تیازولیل دی فنیل تترازولیوم بروماید به وسیله اسانس های آویشن دنایی و تجاری و ترکیب شیمیایی اصلی آن ها، تیمول، بررسی و مقایسه شد.
    نتایج
    نمای حساسیتی میکروارگانیسم ها براساس حساس ترین به مقاوم ترین سودوموناس آئروژینوزا> استافیلوکوکوس اورئوس> اشریشیا کولی> کاندیدا آلبیکنس و کم ترین غلظت مهار کنندگی و کشندگی 04/0-10 میلی گرم در هر میلی لیتر بود. رادیکال زدایی نیتریک اکساید وابسته به دوز با IC50 برابر 5، 75 و 863 میکروگرم و فنل کل معادل 79/6±07/644، 55/2±94/16 و 31/2±33/10 میکروگرم گالیک اسید در هر میلی گرم نمونه به ترتیب در اسانس آویشن دنایی، اسانس تجاری و تیمول تعیین شد. سمیت سلولی آن ها بر سلول های طبیعی انسان به صورت 50 درصد غلظت ممانعت (IC50) به ترتیب 1455، 10/12 و 2867 میکروگرم و در خصوص سلول های سرطانی به ترتیب 95/4، 61/3 و 1730 میکروگرم بود.
    نتیجه گیری
    آویشن با خاصیت خوب ضد میکروبی، می تواند در پیشگیری از تشکیل محصولات سمی نیتروژن واکنش گر نیز مؤثر بوده و به عنوان یک آنتی اکسیدان خوب مستقیما NO و O2− را بزداید. تاثیر کشندگی غلظت کم اسانس بر سلول های سرطانی بدون تاثیر منفی بر سلول های طبیعی نویدبخش امکان استفاده در مبارزه با سلول های سرطانی است.
    کلیدواژگان: آویشن، ضد میکروب، آنتی اکسیدان، نیتریک اکساید، روغن های اسانسی
  • سعید سلالی، سعید کاویانی، علی اکبر موثق پور، محمدرضا علی پرستی، مسعود سلیمانی، مهرداد نوروزی نیا، سعید آبرون، زینب کاویانی صفحه 49
    هدف
    در این مطالعه بیان ژن های MDR1 و hOCT1 در بیماران مبتلا به لوسمی میلوئیدی مزمن و افراد طبیعی با استفاده از RT-Real Time PCR مطالعه شد.
    مواد و روش ها
    برای ارزیابی بیان ژن از سیستم Real-Time PCR با Syber Green Master-Mix استفاده شد. از تعداد 30 بیمار مبتلا به لوسمی میلوئیدی مزمن و 27 فرد سالم نمونه گیری شد. نتایج Real Time-PCR به روش سنجش نسبی ارزیابی شد.
    نتایج
    نتایج تحقیق حاضر نشان داد که MDR1 افزایش بیان معنی داری در گروه بیماران تحت درمان با ایماتیب دارد و این افزایش با پیشرفت بیماری مرتبط است و در فازهای تسریع کننده و بلاستیک در مقایسه با فاز مزمن بیماری، افزایش بیان MDR1 مشاهده می شود. در مقابل بیان hOCT1 تغییر معنی داری نسبت به گروه طبیعی نداشت.
    نتیجه گیری
    افزایش بیان MDR1 در غشای سلول سرطانی باعث کاهش غلظت داخل سلولی دارو شده و فعالیت تیروزین کیناز BCR-ABL مهار نشده و سلول به حالت سرطانی باقی مانده و دچار مرگ برنامه ریزی شده نمی شود و بیماری به طرف فاز تسریع شده و بلاستیک پیشرفت می کند. همچنین تغییرات در بیان hOCT1 به عنوان ناقل درون دهی داروی ایماتیب می تواند بر غلظت داخل سلولی دارو و در نهایت، بر نتیجه درمان تاثیرگذار باشد که در این مطالعه بیان ژن hOCT1 متغیر بود و تغییرات معنی داری مشاهده نشد.
    کلیدواژگان: لوسمی میلوئیدی مزمن، MDR1، hOCT1، بیان ژن، Real، Time PCR
  • مجید فرش دوستی حق، مهرداد نوروزی نیا، یوسف مرتضوی، مسعود سلیمانی، سعید کاویانی، مریم محمودی نیا میمند صفحه 59
    هدف
    زولدرونیک اسید به عنوان یکی از درمان های بیماری استئوپورز در تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی نقش دارد. با این حال مکانیسم اثر این دارو در القای تمایز استئوبلاستیک سلول های بنیادی مزانشیمی هنوز به خوبی شناخته نشده است. بر این اساس در این تحقیق تاثیر زولدرونیک اسید روی متیلاسیون پروموتر ژن های RUNX2 و DLX5 ارزیابی شد.
    مواد و روش ها
    سلول های بنیادی مزانشیمی انسانی پس از جداسازی و تکثیر، تحت تیمار ضربانی با زولدرونیک اسید با غلظت نهایی 5 میکرومولار به مدت 3 ساعت قرار گرفتند و به مدت 3 هفته در محیط تمایزی کشت داده شدند. استخراج DNA در هفته های اول، دوم و سوم تمایز استئوبلاستیک و همچنین از سلول های بنیادی مزانیشیمی صورت گرفت. پس از تیمار DNA با سدیم بی سولفیت، آزمایش PCR اختصاصی متیلاسیون با استفاده از آغازگرهای متیله و غیر متیله به منظور ارزیابی متیلاسیون پروموتر ژن های RUNX2 و DLX5 انجام شد.
    نتایج
    نتایج آزمایش PCR اختصاصی متیلاسیون با آغازگرهای متیله و غیرمتیله برای ژن های RUNX2 و DLX5 در سلول های تمایز یافته استئوبلاستی و سلول های بنیادی مزانشیمی مثبت بود. بر این اساس وضعیت متیلاسیون ناحیه پروموتری ژن های RUNX2 و DLX5 نشان دهنده متیلاسیون ناکامل است.
    نتیجه گیری
    ژن های RUNX2 و DLX5 در تمایز استئوبلاستیک ناشی از داروی زولدرونیک اسید تغییر آرایش متیلاسیون نمی دهند. نتایج بررسی حاضر نشان داد که زولدرونیک اسید به واسطه مکانیسم های اپی ژنتیکی به ویژه متیلاسیون پروموتر منجر به تمایز استئوبلاستیک سلول های بنیادی مزانیشیمی نمی شود. بر این اساس، مکانیسم اثر داروی زولدرونیک اسید در سلول های بنیادی مزانشیمی در القای تمایز می تواند یک مسیر مستقل از تغییرات اپی ژنتیکی در این دو ژن باشد.
    کلیدواژگان: زولدرونیک اسید، متیلاسیون DNA، سلول های بنیادی مزانشیمی، تمایزاستئوبلاستی
  • نسیم قربانمهر، محمود تولایی، بهزاد عین اللهی، محمودرضا رفیعی، سیدجواد مولی * صفحه 71
    هدف

    در حال حاضر روش های تشخیص سرطان مثانه از حساسیت و اختصاصیت لازم برخوردار نیست؛ بنابراین یافتن نشانگر های تومور جدید که حساسیت و اختصاصیت بالایی داشته باشد مورد توجه قرار گرفته است. microRNA ها (miRNA، miR) گروه بزرگی از RNA های کوچک مولکول و غیرکدکننده است که نقش مهمی در کنترل بیان ژن ها دارد. مطالعات اخیر نشان داده است که الگوی بیان miRNA ها در سلول های سرطانی به طور معنی داری تغییر می کند. این تغییرات، در اکثر سرطان ها اختصاصی و وابسته به نوع سرطان است. هدف از این مطالعه بهینه یابی روش استخراج RNA کل حاوی miRNA ها از ادرار و استفاده از آن به عنوان یک روش تکرارپذیر در بررسی حضور miRNA ها در ادرار مبتلایان به سرطان مثانه است.

    مواد و روش ها

    RNA کل از ادرار مبتلایان به سرطان مثانه و گروه کنترل با استفاده از محلول RNX و تریزول LS به دو روش اصلی و تغییر یافته استخراج شد. حضور miRNA های با وابستگی احتمالی به سرطان مثانه به روش Real-Time در این نمونه ها بررسی شد.

    نتایج

    روش های RNX و تریزول LS تغییر یافته، روش های مناسبی برای استخراج RNA از نمونه های ادرار است. سطح mir-21 در RNA های استخراج شده به روش تریزول LS تغییر یافته بالاتر از روش RNX بود. قابل ذکر است که مقایسه نمونه های ادرار منجمد و غیرمنجمد نشان دهنده سطح بالاتر microRNA ها در نمونه های منجمد بود.

    نتیجه گیری

    در این مطالعه روشی آسان، تکرارپذیر و قابل اعتماد برای تشخیص تکثیر miRNA ها در نمونه های ادراری به دست آمد. براساس اطلاعات miRNA ها نشانگرهای مناسبی برای تشخیص اولیه و غربالگری سرطان مثانه است.

    کلیدواژگان: ادرار، نشانگرهای تومور، MicroRNAs، سرطان مثانه
  • شادی قندیان، مرتضی ستاری *، وجیهه سادات نیک بین، محمد مهدی اصلانی صفحه 81
    هدف

    شیگلوزیس یکی از علت های اصلی مرگ و میر کودکان مبتلا به اسهال در کشورهای در حال توسعه است. بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی این باکتری از اهمیت زیادی برخوردار است. ژن ipaH یکی از ژن های ویرولانس است که می تواند به عنوان شناساگر در تشخیص شیگلا بکار رود.

    مواد و روش ها

    در مجموع 100 نمونه شیگلا از نقاط مختلف ایران جمع آوری شد. این سویه ها با آزمون های بیوشیمیایی و سرولوژیکی برای 4 گونه دیسانتری، سونئی، بوییدی و فلکسنری شناسایی شدند. آزمون حساسیت آنتی بیوتیکی این سویه ها به روش انتشار در آگار نسبت به 14 آنتی بیوتیک مختلف انجام شد. PCR ژن ipaH با استفاده از PCR اختصاصی برای تمامی سویه ها انجام شد.

    نتایج

    براساس نتایج این مطالعه 36 (73 درصد) سویه شیگلا سونئی، 9 (18 درصد) سویه شیگلا فلکسنری، 3 (5 درصد) سویه شیگلا بوییدی و 2 (4 درصد) سویه شیگلا دیسانتری شناسایی شد. نتایج نشان می دهد که تقریبا 50 درصد سویه ها به تتراسایکلین و کوتریموکسازول مقاوم بودند. میزان مقاومت به آنتی بیوتیک های مورد مطالعه در سویه های شیگلا سونئی بیشتر از سایر گونه ها بود. حضور ژن ipaH با انجام PCR در تمام سویه ها تایید شد.

    نتیجه گیری

    در این بررسی شیوع سویه های شیگلا سونئی نسبت به سایر گونه ها بالاتر است. سویه های مورد مطالعه نسبت به سفالوسپورین های نسل سوم و آمینوگلیکوزیدها حساسیت بالایی را نشان دادند. بررسی ژن ویرولانس ipaH نشان داد که می توان از این ژن به عنوان نشانگری برای شناسایی سریع گونه های شیگلا استفاده کرد.

    کلیدواژگان: شیگلا، حساسیت آنتی بیوتیکی، ژن ipaH، ایران
|
  • Mehdi Allahbakhshian Farsani, Naser Amirizadeh*, Mehdi Forouzandeh, Masoud Soleimani, Ali Akbar Pourfatholah Page 1
    Objective
    Nowadays, cord blood Hematopoietic stem cells (HSCs) are known as a valuable source for bone marrow transplantation but unfortunately their insufficient number is a limiting factor for using them in adult bone marrow transplantation. Cord blood HCSs expansion is an approach to overcome this problem, by inducing their self-renewal. TGF-b signaling pathway is a key inhibitory agent for HSCs self-renewal. In this study, we tried to enhance self-renewal of long term culture initiating cell by inhibiting TGFbR2 expression.
    Materials And Methods
    CD34+ HSCs were isolated from cord blood units with MACS column. SiRNA against TGFbR2 was transfected by Lipofectamine™ RNAiMAX as transfection reagent. HSCs were cultured in IMDM medium containing 10% FBS and early acting cytokines (Flt3L, SCF, Tpo) for 8 days. Then we evaluated TGFbR2 expression by QRT-PCR. The CD34+ subpopulation of cultured cells were examined by flow cytometry on the 8th day. Finally the expanded cells were evaluated for the presence of early hematopoietic stem cells by LT-CIC and clonogenic assays.
    Results
    According to our results, TGFbR2 down regulation increases CD34+ subpopulation of HSCs. In addition, LT-CIC assay showed an enhancement in primitive hematopoietic stem cell capable of self-renewal.
    Conclusion
    All in all, it seems that positive regulators have attracted more attention in the field of HSCs expansion while negative regulators have same importance in self-renewal process of HSCs and their inhibition can be a beneficial tool for enhancement of HSCs self-renewa.
  • Zahra Eslami Rad, Abdolhassein Dalimi, Fatemeh Ghaffarifar, Zohreh Sharifi Page 17
    Objective
    Toxoplasmosis can lead to severe pathological effects in both infected humans and animals. The various DNA vaccines against Toxoplasma compose of single or cocktail antigens have been investigated but they have partial protective against disease. In this study, we used pcROP1 as a DNA vaccine and aluminium phosphate and aluminium hydroxide to compare their efficacy as mineral adjuvants.
    Materials And Methods
    BALB/c mice immunized with pcROP1 alone or with co-administration of Alpo4 or Alum and the effectiveness of these two adjuvants were compared using lymphocyte proliferation assay, cytokine and antibody assay and survival time.
    Results
    The group co-administered alum elicited stronger humoral and Th1-type cellular immune responses than the group co-administered Alpo4, while immune response in group administered with pcROP1 alone is higher than them. When challenged with Toxoplasma gondii RH strain, mice immunized with or without alum had significantly higher survival rates, whereas there was no notable enhancement of survival rate in Alpo4 group (P≤0.05).
    Conclusions
    Our result suggest that pcROP1 plus alum and aluminium phosphate not strongly potentiate the efficacy of this DNA.
  • Farnoosh Haghighi, Shahla Roudbar Mohammadi, Neda Soleimani, Morteza Sattari Page 29
    Objective
    Nowadays notable increase in acquired resistance of Candida species to antifungal drugs and necessity of using agents with antifungal properties is unavoidable. In some plants due to presence of components such as polyphenols have antimicrobial properties. In this study antifungal effects of essential oils of Thymus vulgaris, Petroselinum crispum, Cuminum cyminum and Bunium persicum on standard strain of Candida albicans were evaluated.
    Materials And Methods
    25 grams leafs of the Thymus vulgaris and Petroselinum crispum and seeds of the Cuminum cyminum and Bunium persicum were dried and grinded after that the essential oils of each mentioned plant were prepared by Clevenger system. Serial dilutions of essential oils were made in 96 well microtiter plates. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Inhibitory zone diameter were assessed by Microdilution broth and Disc diffusion agar techniques, MIC50, MIC90 and MFC were also determined.
    Results
    Minimum inhibitory concentration 90(MIC90) essential oils of Thymus vulgaris, Petroselinum crispum, Cuminum cyminum and Bunium persicum were respectively 25, 72, 412, 130 µg/ml and Minimal Fungicide Concentration (MFC) were 48, 146, 62, 280. Inhibitory zone diameters were 28, 20, 12, 15 millimetres.
    Conclusion
    In this evaluation essential oils of Thymus vulgaris, Petroselinum crispum, Cuminum cyminum and Bunium persicum showed suitable antifungal effects against growth of standard strain of Candida albicans. Thus these herbal essences after supplementary studies possibly can be suitable substitute for chemical medicine on Candida infections especially on mucocutaneous Candidiasis.
  • Mehdi Dadashpour, Iraj Rasooli, Rahim Sorouri Zanjani, Fatemeh Sefidkon, Massoud Taghizadeh, Shakiba Darvish Alipour Astaneh Page 37
    Objective
    Despite toxic effects of some essential oils, their use is not under control. With a view to increasing trend of utilisation of herbal products, some biological aspects of Thymus daenensis are repoted here for the first time.
    Materials And Methods
    Antimicrobial properties using disk diffusion and dilution tests, nitric oxide radical scavenging by Marcocci et al method and cytotoxic properties employing dimethylthiazolyl diphenyltetrazolium bromide reduction test were carried out with Thymus daenensis and commercial Thyme essential oils and their main chemical compound, thymol.
    Results
    The microbial sensitivity to the oils were in Candida albicans> E.coli> S.aureus> P. aeruginosa order. The minimum inhibitory and microbicidal concentrations were in the range of 0.04-10mg/ml. Nitric oxide radical scavenging was dose dependent with an IC50 of 5, 75, 863 µg, and total phenolics of 644.07±6.79, 16.94±2.55, 10.33±2.31µg Gallic acid equivalent per mg sample and total flavonoid content of 73.51±1.34, 0.56±0.02, 0.21±0.09 mg Catechin equivalent per gram T.daenensis oil, commercial thyme oil and thymol respectively. The concentrations from T.daenensis oil, commercial thyme oil and thymol required to exert 50% fatal effect (IC50) on healthy human normal lymphocytes and Hela cells were 1455, 12.10, 2867 and 4.95, 3.61, 1730 µg respectively.
    Conclusion
    T. daenensis with its good antimicrobial property can prevent formation of toxic reactive oxygen species and as a good antioxidant, it can directly scavenge NO and O2−. With a view to cancerous cells killing properties of the oils at their lowest concentrations without fatal effect on normal healthy cells, feasibility of their application in combating cancerous cells may be promising.
  • Saeid Solali, Saeid Kaviani, Ali Akbar Movassaghpuor, Mohammad Reza Ali-Parasti, Masoud Soleimani, Mehrdad Noruzinia, Saeid Abroun, Zeinab Kaviani Page 49
    Objective
    In this study quantitative expression of MDR1 and hOCT1 genes in CML patients and normal people were measured using Real-Time PCR.
    Materials And Methods
    To study quantitative expression of these genes by real-time PCR, master-mix with syber green was used. Peripheral blood samples from 30 CML patients and 27 normal persons were harvested. Real-time PCR results were analyzed with relative quantification method.
    Result
    This study showed that in the patients group who were under treatment with Imatib, MDR1 gene expression was increased which was statistically significant. This increase has a direct relation with disease progress. Gene expression in AP and BP patients was also higher than CP patients. In contrast, hOCT1 expression in patients group in comparison with normal group was not statistically significant.
    Conclusion
    MDR1 increase in leukemic cell membrane results in the reduction of intra-cellular drug concentration. Thus, optimal concentration of drug for inhibition of BCR-ABL tyrosine kinase is not achieved which culminated in disease progression to AP and BP phases. Moreover changes in hOCT1 gene expression as an influx transporter of Imatib could affect intracellular concentration of drug and finally determine therapy outcome. However, in this study hOCT1 gene expression was variable and was not statistically significant.
  • Majid Farshdousti Hagh, Mehrdad Noruzinia, Yousef Mortazavi, Masood Soleimani, Saeid Kaviani, Maryam Mahmoodinia Maymand Page 59
    Objective
    Zoledronic acid as a main treatment for osteoporosis has an important role in differentiation of mesenchymal stem cells. However, mechanism of osteoblastic differentiation induction by zoledronic acid is not well understood until now. In this research we evaluate zoledronic acid effect on methylation status of RUNX2 and DLX5 promoters.
    Materials And Methods
    After isolation and expansion of hMSCs from BM, they were pulse treated with 5μM ZA for 3h, and incubated in osteogenic differentiation medium for 3 weeks. DNA was extracted after first, second and third weeks of culture and also from undifferentiated MSCs. After SBS treatment, gene specific methylation analysis for RUNX2 and DLX5 were carried out by MSP using methylated and unmethylated primers.
    Results
    In the genes RUNX2 and DLX5, M and U primers of MSP amplified promoter regions of undifferentiated and osteoblastic differentiated MSCs. Therefore, methylation status in RUNX2 and DLX5 promoters present incomplete methylation.
    Conclusion
    Methyltion patterns of RUNX2 and DLX5 don’t change during zoledronic acid osteoblastic differentiation of MSCs. Our findings show that zoledronic acid does not induce osteoblastic differentiation via epigenetic mechanisms. Therefore, zoledronic acid can induce osteoblastic differentiation in a manner independent from DNA epigenetic changes.
  • Nassim Ghorbanmehr, Mahmood Tavallaei, Behzad Einollahi, Mahmoud-Reza Rafiee, Seyed Javad Mowla Page 71
    Objective

    The current methods for bladder cancer diagnosis suffer from low sensitivity and specificity. Therefore, finding a novel tumor markers with high specificity and sensitivity is of great interest. MicroRNAs (miRNA, miR) are small endogenously-produced, non-coding RNAs with an important role in regulating gene expression. Recent studies show that miRNAs expression profiles represent significant tumor-specific changes that are unique for most cancers. The aim of this study was to optimize miRNA containing total RNA extraction from urine and use it as a reliable and repeatable technique for miRNA detection in urine of patients with bladder cancer.

    Materials And Methods

    Total RNA was extracted from the urine of patients with bladder cancer and normal individuals using RNX and Trizol solutions with and without modifications of original protocols. Real-time quantitative RT-PCR was then used to detect miRNAs with a potential link to bladder tumorigenesis.

    Results

    RNX and the modified Trizol are practical methods for RNA extraction from urine samples. The mir-21 amplification of the extracted RNAs using modified Trizol method was more efficient than that of RNX method. It is noteworthy that, the levels of miRNAs expression were much higher in the frozen urines compared to the fresh ones.

    Conclusion

    We have succeeded to set-up a protocol to easily amplify miRNAs in urine samples. Based on the data, microRNAs seem to be good biomarkers for early detection and screening of bladder cancer.

  • Shadi Ghandian, Morteza Sattari, Vajihe Sadat Nikbin, Mohammad Mehdi Aslani Page 81
    Objective

    Shigellosis is one of the most common causes of morbidity and mortality in children with diarrhea in developing countries. It is essential to assess the antibiotic resistance patterns of these bacteria. ipaH gene is one of the virulence factors which can be used for detection of Shigella spp.

    Materials And Methods

    Total of 100 isolates of Shigella were collected from different provinces of Iran. This isolates were characterized by biochemical tests and serological tests using polyclonal antisera for 4 species of S. dysenteriae, S. sonnei, S. boydii and S. flexneri. Antibiotic susceptibility assay for 14 different antibiotics was carried out using agar disc diffusion method. Presence of ipaH gene was investigated by PCR using specific primers.

    Results

    From the results of this study the Shigella isolates were classified as follows: 36 (%73) Shigella sonnei, 9(%18) Shigella flexneri, 3(%5) Shigella boydii, 2(%4) Shigella dysenteriae. Approximately %50 of the Shigella isolates were resistant to Tetracycline and Cotrimoxazole. Shigella sonnei showed more resistance than other serotypes against the studied antibiotics. PCR assays showed that all isolates harbored ipaH gene.

    Conclusion

    The results showed that prevalence of Shigella sonnei is higher than other serotypes. The isolates showed high sensitivity to third generation cephalosporines and aminoglycosides. PCR detection of ipaH gene as a reliable marker for identification of Shigella species could be recommended.