فهرست مطالب

فصلنامه دنیای میکروب ها
سال سوم شماره 4 (پیاپی 9، زمستان 1389)

  • تاریخ انتشار: 1389/10/11
  • تعداد عناوین: 6
|
  • سمانه هوشمند، محمدجواد مهربانپور*، عبدالله رحیمیان صفحات 215-221
    سابقه و هدف

    ویروس آنفلوانزای H9N2 یکی از ویروس های با بیماری زایی کم در پرندگان می باشد. این ویروس به عنوان بومی ایران از سال 1377 صنعت طیور را درگیر کرده و تاکنون خسارات سنگین و قابل ملاحظه ای را موجب شده است. واکسیناسیون، یکی از راهبردهای مقابله با این ویروس می باشد. هدف از این پژوهش، بررسی توانایی واکسن کشته روغنی آنفلوانزا (ساخت موسسه واکسن وسرم سازی رازی) در مقابله با جدایه های در حال گردش  این ویروس در شیراز بود.

    مواد و روش ها

    در این مطالعه 50 قطعه جوجه به 5 گروه 10 تایی شامل گروه تست و گروه کنترل تقسیم شدند.40 قطعه جوجه (گروه 1 تا 4) با واکسن کشته روغنی آنفلوانزا، ساخت موسسه واکسن وسرم سازی رازی واکسینه شدند و 10 قطعه جوجه به عنوان گروه کنترل واکسنی دریافت نکردند. دو هفته پس از واکسیناسیون همه گروه های واکسینه و کنترل، با ویروسهای آنفلوانزای H9N2  جدا شده از مرغداری های شیراز مربوط به سال 1389 تلقیح شدند. نمونه های سواب نای و کلواک در روزهای 1، 3، 5، 7، 9 و 11 پس از تلقیح، جمع آوری و فرایند های آماده سازی جهت جداسازی ویروس انجام گردید.

    یافته ها

    نتایج جداسازی ویروس در گروه های واکسینه و کنترل نشان داد که انتشار ویروس از طریق نای و کلواک در گروه 1، از روز پنجم و در گروه های 2، 3 و 4 از روز هفتم پس از تلقیح کاهش یافت.اما در گروه کنترل تا روز یازدهم پس از تلقیح نیز انتشار ویروس ادامه داشت.

    نتیجه گیری

    نتایج نشان داد که واکسن آنفلوانزای کشته روغنی در کاهش انتشار و رونویسی آنفلوانزای طیور موثر می باشد.

    کلیدواژگان: ویروس آنفلوانزا، واکسن کشته روغنی، آنفلوانزا طیور، سویه H9N9
  • ناهید نقشگر*، محمد مهدی نام آوری، شمسی اژدهاکش پور، محمدعبدی گودرزی، سید محمدحسین حسینی، کسری اسماعیل نیا، معصومه حیاتی، امیدرضا امر آبادی صفحات 222-228
    سابقه و هدف

    تیلریا لستوکاردی (Theileria lestoquardi) از مهم ترین عوامل تیلریوز بدخیم در گوسفند و بز است که توسط کنه های سخت به میزبان نهایی منتقل می گردد. این تک یاخته تنها یوکاریوتی است که قادر به ترانسفورم کردن سلول میزبان می باشد. این پژوهش، با هدف تهیه استابلیت حاوی اسپروزوایت تیلریا لستوکاردی و استفاده از آن برای تولید رده سلولی حاوی شایزونت تیلریا لستوکاردی در شرایط آزمایشگاهی انجام شد.     

    مواد و روش ها

    پس از آلوده کردن کنه های نوچه پرورشی از طریق قرار دادن آنها بر روی گوش گوسفند ناقل تیلریا لستوکاردی و هموژن کردن کنه های بالغ آلوده، استابلیت تیلریا لستوکاردی تهیه گردید. در مرحله بعد لنفوسیت های جمع آوری شده از یک گوسفند سالم در مجاورت استابلیت تهیه شده به منظور تولید سلول ترانسفورم شده حاوی تیلریا لستوکاردی کشت داده شد.     

    یافته ها

    این پژوهش منجر به تولید لنفوسیت ترانسفورم شده با تیلریا لستوکاردی در شرایط آزمایشگاهی گردید. این رده سلولی بوکت نامیده شد و نتیجه توالی ژنی آن در ژن بانک با شماره دسترسی  GU233776ثبت گردید.     

    نتیجه گیری

    رده سلولی بوکت تولید شده در این پژوهش، دومین لنفوسیت گوسفندی حاوی تیلریا لستوکاردی در ایران      می باشد که به صورت رده سلولی دایمی درآمده است.

    کلیدواژگان: تیلریا لستوکاردی، استابلیت، رده سلولی
  • کرامت الله دری*، وحید حمایت خواه جهرمی، نجمه نامدار، حسین کارگر جهرمی صفحات 229-237
    سابقه و هدف

    باکتری های اسید لاکتیک گروهی از باکتری های گرم مثبت، غیر متحرک و بدون اسپور می باشند که با تولید محصولات تخمیری و اسید لاکتیک اثرات مفیدی بر سلامت میزبان ایجاد می کنند. هدف از این پژوهش، جداسازی سویه های لاکتوباسیلوس از نمونه های مدفوعی کودکان و بررسی خاصیت ضد میکروبی آن ها علیه برخی از باکتری های بیماری زای دستگاه گوارش از جمله اشریشیا کلی، سالمونلا تیفی موریوم و هلیکوباکتر پیلوری بود.

    مواد و روش ها

    به منظور جداسازی لاکتوباسیلوس ها از محیط MRS Agar استفاده شد. شناسایی لاکتوباسیلوس ها بر اساس مرفولوژی، خصوصیات بیوشیمیایی و فیزیولوژیک صورت گرفت. اثر بازدارندگی لاکتوباسیلوس های جدا شده بر رشد باکتری های بیماری زا با دو روش چاهک و دیسک صورت گرفت. سویه های لاکتوباسیلوس جدا شده پس از کشت در محیط MRS broth سانتریفیوژ گردید. در پلیت های MRS Agar پس از کشت چمنی باکتری های پاتوژن، مقدار 100 میکرولیتر از محلول رویی حاصل از رشد لاکتوباسیلوس ها به چاهک ها تلقیح و هاله عدم رشد پس از 48-24 ساعت بررسی گردید.

    یافته ها

    از 40 نمونه لاکتوباسیلوس جداشده، 19مورد (50/47%) دارای اثر بازدارندگی رشد علیه باکتری های بیماری زا بود. بیشترین سویه های شناسایی شده دارای اثربازدارندگی، شامل لاکتوباسیلوس پلانتاروم، لاکتوباسیلوس فرمنتوم و لاکتوباسیلوس رامنوسوس بود. بیشترین اثربازدارندگی جدایه های لاکتوباسیلوس علیه اشریشیاکلی و سالمونلا مشاهده گردید. در تمامی نمونه ها، لاکتوباسیلوس رامنوسوس و لاکتوباسیلوس فرمنتوم بیشترین اثربازدارندگی رشد را روی سویه های پاتوژن داشتند.

    نتیجه گیری

    نتایج این پژوهش نشان داد که سویه های لاکتوباسیلوس جدا شده از مدفوع برای درمان اسهال و سایر بیماری های گوارشی می تواند مناسب باشد. از این رو به نظر می رسد که استفاده از این باکتری ها در محصولات لبنی می تواند در  پیشگیری و درمان سودمند باشد.

    کلیدواژگان: لاکتوباسیلوس، پروبیوتیک، سالمونلا تیفی موریوم، اشریشیا کلی، هلیکوباکتر پیلوری
  • یاسمین کیانی، یحیی تهمتن*، محمدحسین حسینی، معصومه حیاتی صفحات 238-244
    سابقه و هدف

    اسهال ناشی از اشریشیاکلی 99K در گوساله ها به ویژه در نخستین روزهای پس از تولد، به علت تلفات و خسارات اقتصادی حاصله از اهمیت زیادی برخوردار است. در این مطالعه شیوع ژن های عوامل بیماریزایی اشریشیاکلی 99 K  با استفاده از تکنیک Multiplex PCR و سپس الگوی پروتیینی این باکتری ها با روش های مختلف بید، اوره و پودر شیشه با SDS- PAGE ارزیابی گردید.

    موادوروش ها

    300 سواب رکتوم از گوساله های 1 تا 30 روزه  مبتلا  به  اسهال  طی سال های 1390-1389 جمع آوری شد. یک بخش جهت انجام Multiplex PCR برای شناسایی ژن های عوامل بیماریزایی 99K، 41F و STa  استفاده گردید و بخش دیگر جهت کشت بر روی محیط های مختلف جهت جداسازی اشریشیا کلی و  SDS-PAGE مورد استفاده قرار گرفت.

    یافته ها

    نتایج PCR نشان داد از 200 اشریشیاکلی جداشده، 16مورد دارای ژن های عوامل بیماریزایی 99K، 41 Fو STa    می باشند و در هیچکدام از نمونه های جدا شده از گوساله ها سم حساس به حرارت  LT))وجود نداشت. همچنین نتایج حاصل از SDS-PAGE نشان داد که الگوهای پروتیینی باکتری های مختلف اشریشیا کلی متفاوت می باشد. نتایج SDS-PAGE حاصل از ستون بیانگر وجود تنها یک باند مربوط به آنتی ژن 99K بود.

    نتیجه گیری

    مشاهده فاکتورهای حدت باکتری های اشریشیا کلی 99K جدا شده نشان داد که همه باکتری ها حداقل دارای سه ژن 99K، 41F و  Staمی باشند. با وجود این که از نظر مولکولی تفاوت معنی داری در بین نمونه ها مشاهده نشد. اما از نظر الگوی پروتیینی تفاوت های قابل ملاحظه ای در بین باکتری های جدا شده وجود داشت. بنابر این می توان نتیجه گرفت که باکتری های متفاوت الگوهای پروتیینی مختلف و در نتیجه بیماریزایی متفاوتی دارند.

    کلیدواژگان: اشریشیاکلی 99K، PCR، SDS-PAGE، گوساله
  • سارا اسعدی*، کاووس صلح جو، محمد کارگر، عباسعلی رضائیان صفحات 245-250
    سابقه و هدف

    اشریشیا کلی عامل بیش از 80%  از عفونت های ادراری در تمام گروه های سنی جامعه است. سویه های اشریشیاکلی به چهار گروه فیلوژنتیک تقسیم می شوند. اغلب جدایه های های بیماریزای خارج روده ای متعلق به گروه B2 وD هستند. هدف از این پژوهش، تعیین گروه های فیلوژنتیک اشریشیاکلی جدا شده از بیماران با عفونت ادراری در جنوب ایران بود. مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی _ توصیفی بر روی اشریشیاکلی  جداشده از کشت ادرار بیماران مراجعه کننده به آزمایشگاه بیمارستان پیمانیه جهرم در سال 1389 انجام شد. از آزمون های بیوشیمیایی برای تعیین هویت باکتری های جداشده استفاده شد. سپس طبقه بندی گروه های فیلوژنتیک سویه های اشریشیاکلی با استفاده ازپرایمرهای اختصاصی ChuA وyjaA وTspE4.C2  و آزمون PCR انجام شد.

    یافته ها

    از60 باکتری اشریشیاکلی شناسایی شده، 47 مورد (34/78%) مربوط به زنان و 13 مورد (76/21%) مربوط به مردان بود. شایع ترین گروه های فیلوژنتیک شناسایی شده D ،A و B1 به ترتیب با فراوانی70% ،3/23% و7/6 % بودند. اما درهیچ کدام از نمونه های مورد بررسی گروه B2 شناسایی نشد.همچنین  بین گروه فیلوژنتیکی و متغیرهای سن، جنس، سابقه عفونت ادراری، سابقه مصرف آنتی بیوتیک و سابقه بستری شدن در بیمارستان ارتباط معناداری مشاهده نشد.

    نتیجه گیری

    اشریشیاکلی جدا شده از عفونت های دستگاه ادراری در این منطقه، بیشتر متعلق به گروه فیلوژنتیک D بودند که در مقایسه با سایر مناطق از نظر نوع گروه فیلوژنتیکی متفاوت می باشند.

    کلیدواژگان: گروه فیلوژنتیک، اشریشیا کلی، عفونت دستگاه ادراری، PCR
  • بهار مرید*، شهاب حاج منصور صفحات 251-259
    سابقه و هدف

    یکی از بهترین راه های کنترل بیماری پوسیدگی طوقه و ریشه گوجه فرنگی ناشی از  F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici استفاده از ارقام مقاوم می باشد. نشانگرهای مولکولی دارای همبستگی با ژن مقاومت، می توانند در برنامه های اصلاحی گوجه فرنگی مورد استفاده قرار گیرند. هدف از این پژوهش، شناسایی ارقام مقاوم (دارا بودن ژن Frl) و حساس 27 رقم گیاه گوجه فرنگی با استفاده از نشانگر RAPD بود.      مواد و روش ها: در ابتدا DNA مربوط به 27 رقم گیاه گوجه فرنگی با استفاده از روشCTAB  استخراج شد. از تکنیک PCR برای شناسایی F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici استفاده شد. سپس برای تکثیر ژن مقاومت Frl از نشانگر RAPD (UBC 194) استفاده گردید. نتایج به کمک آزمون بیماری زایی تایید شدند.      یافته ها: در این مطالعه با استفاده از نشانگر UBC 194 مشخص گردید که از 27 رقم و هیبرید مورد مطالعه، باند شاخص 590 جفت بازی (وجود ژن مقاومت Frl) در20 رقم و هیبرید تشکیل شده بود. ارزیابی آزمون بیماری زایی نشان داد ارقامی از گیاه گوجه فرنگی که قطعه مربوط به ژن مقاومت Frl را تکثیر کرده بودند، فاقد هر نوع علایم بیماری بودند. اما گیاهانی که این قطعه ژنی را نداشتند، علایم بیماری را با شدت های مختلف نشان می دادند.      نتیجه گیری: با کاشت ارقام مقاوم یافت شده در این پژوهش در مناطق آلوده، می توان بیماری پوسیدگی طوقه و ریشه را بدون استفاده از سموم شیمیایی کنترل نمود.

    کلیدواژگان: پوسیدگی فوزاریومی طوقه، RAPD، ژن Frl
|
  • Samaneh Hooshmand, Mohammad Javad Mehrabanpour *, Abdollah Rahimian Pages 215-221
    Background and objective

    Influenza virus H9N2 is a low pathogenic avian influenza that its first outbreak in Iran was reported in 1998 and caused appreciable economic losses in the poultry industry. Vaccines are one of applicable approach for protect the avians from avian influenza viruses. This study aimed to evaluate a killed avian influenza vaccine (produced in Razi vaccine and serum research institute) against current isolates in Shiraz.

    Materials and Methods

    In this study, fifty broiler chickens were divided into 5 ten-bird groups including test and control groups. Forty broiler chickens (group 1, 2, 3 and 4) were vaccinated with the killed oil-emulsion influenza vaccine that was obtained from Razi Vaccine and Serum Research Institute. Ten chickens were used as control group (Nonvaccinated group). After two weeks both vaccinated and control chickens were inoculated with H9N2 influenza viruses that were isolated from chickens farms of Shiraz in 2010. The cloacal and tracheal swab samples were collected from chickens at 1,3,5,7,9,11 days after infection and were processed for virus isolation.

    Results

    The results showed that after five days for group 1 and after seven days for groups 2, 3 and 4, virus shedding into tracheal and cloacal samples was significantly decreased. However, the shedding continued for 11 days in control group.

    Conclusion

    The results suggested that the killed oil-emulsion influenza vaccine could efficiently decrease AI replication and its shedding in the broiler chickens.

    Keywords: Influenza virus, killed oil-emulsion vaccine, Avian influenza, and H9N9 Strain
  • Nahid Naghshgar *, Mohammad Mehdi Namavari, Shamsi Ezhdahakosh Pour, Mohammad Abdi Goodarzi, Mohammad Hosein Hoseini, Kasra Esmail Nia, Masoume Hayati, Omid Reza Amr Abadi Pages 222-228

    Introduction and

    Objectives

    Malignant sheep and goats theileriosis is one of the most important protozoan diseases of sheeps in Iran. Theileria lestoquardi is the only intracellular eukaryotic pathogen that is able to transform its host cells reversibly. Therefore, design of a cell line of ovine lymphocyte that is transformed by the T. lestoquardi is very valuable.

    Materials and Methods

    The breeding ticks was infected by feeding on the sheeps that were carrier of Theileria lestoquardi sporozoite in order to obtain homogeneous infected ticks. Then, ovine lymphocytes were infected with Theileria lestoquardi sporozoite stabilate to produce lymphocytic cell line containing T. lestoquardi.

    Result

     This research resulted in the development of a new ovine lymphocytic cell line called as Booket. Molecular study confirmed that the cell lines were transformed by T. lestoquardi. The gene sequence of this isolate has been submitted to GenBank with accession no. GU233776.

    Conclusion

    In this study the second lymphocytic cell line containing T. lestoquardi was established in Iran.

    Keywords: T. lestoquardi, Stabelilate, Cell line
  • Keramatollah Dorri *, Vahid Hemayatkhah Jahromi, Najmeh Namdar, Hosein Kargar Jahromi Pages 229-237
    Background and Objective

    Lactic acid bacteria are characterized as gram positive, usually non motile, non-spore forming bacteria that affect the health conditions of their hosts due to production of lactic acid and other fermentative yields. The aim of this study was to isolate Lactobacillus strains from stool sample of children and to determine their antimicrobial activity against common pathogenic bacteria such as Escherichia coli, Salmonella typhimurium and Helicobacter pylori.

    Material and methods

    The bacteria were isolated from the stool samples via cultivation on MRS agar media. Identification of the lactobacilli was performed based on their morphological, physiological and biochemical characteristics. Inhibitory effect of isolated lactobacilli on pathogenic bacteria was assessed by well diffusion and disk diffusion methods. After centrifuging the cultured bacteria and their sedimentation in the tubes, the pathogenic bacteria were plated on MRS agar. Following adding 100µl lactobacillus supernatant to the wells, the results were interpreted after 24-48 h.

    Result

    19 samples out of 40 samples (47.5 %) had inhibitory effect on the studied pathogenic bacteria. L. plantarum, L. fermentum and L. rhamnosus were isolated more than other species. Maximum inhibitory effects of lactobacilli were observed against Escherichia coli and Salmonella. The widest antimicrobial hollow were obtained when the pathogenic bacteria were exposed to the supernatants of L. rhamnosus and L.fermentum.

    Conclusion

    In conclusion, the result showed that Lactobacillus strains are useful for treatment of persistent diarrhea and gastrointestinal disease and their consumption as dairy products would be effective for both prevention and treatment.

    Keywords: Lactobacillus, Probiotics, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Helicobacter pylori
  • Yasaman Kiani, Yahya Tahamtan *, Mohammad Hosein Hoseini, Masumeh Hayati Pages 238-244
    Background and Objective

    Since E. coli K99 is a causative agent of diarrhea and casualties in calf, it has adverse impacts on economy. This research studied the pathogenic factors of the E. coli by Multiplex PCR, and determined protein pattern of different E. coli isolates by SDS-PAGE (sodium dodsil sulfate polyacryl amid gel electroforesis).

    Materials and methods

    300 rectal swabs were collected from 1-30 days-old calf during a period between 2010 to 2011. One part of the samples was studied with Multiplex PCR method for determination of the K99, F41 as well as STa genes, and another part was cultured for E. coli isolation and SDS-PAGE assay.

    Results

    The PCR results indicated that 16 of the 200 isolated E. coli had K99, F41, and STa pathogenic factors. LT was not found in the isolates. SDS-PAGE results showed different protein pattern in the isolated E. coli strains. The results of SDS-PAGE column showed only one band for K99 antigen.

    Conclusion

    Based on the found virulent factors in the isolated E. coli K99, it has been shown that the isolates contain at least three pathogenic genes (K99, F41, and STa). Although no significant difference has been seen between the isolates in terms of gene investigations, there was a meaningful difference in the protein patterns of the isolates. As a conclusion, different bacteria showed different protein patterns and consequently had different pathogenic ability.

    Keywords: E. coli K99, PCR, SDS-PAGE, Calf
  • Sara Asadi *, Kavous Solhjoo, Mohammad Kargar, Abbas Ali Rezaeian Pages 245-250
    Background and Objective

    Escherichia coli is a causative agent of over 80% of urinary tract infections in all ages of the society. Strains of Escherichia coli are divided into four phylogenetic groups. Most of pathogenic extra-intestinal strains often belong to groups D and B2. This study aimed to define the phylogenetic groups of E. coli isolated from urinary tract infections in south of Iran.

    Material and Methods

    This cross– sectional study was carried out on the patients with urinary tract infection who admitted to peymanieh hospital of Jahrom in 2010. Specific biochemical tests were used for identification of bacteria. The phylogenetic groups of E. coli strains were determined by the PCR method and using two specific primers yjaA ChuA and TspE4.C2.

    Results

    Out of 60 identified E. coli, 78.34% were isolated from women while just 21.76% were isolated in men. The most common identified groups were classified as D (70%), A (23.3%) and B1 (6.7%), and none of the species belonged to the B2 group.  Data analysis revealed no significant relationship between phylogentic groups with the variables age, sex, history of urinary tract infection, previous history of antibiotic use and hospitalization.

    Conclusion

    The results showed that most of the E. coli strains isolated from urinary tract infections in this region belonged to phylogenetic group D. Also, the results obtained from this region was different from other area.

    Keywords: Phylogenetic groups, E. coli, Urinary tract infections, PCR
  • Bahar Morid *, Shahab Hajmansoor Pages 251-259
    Background and Objectives

    usarium crown rot caused by F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici is one of reasons of decrease in tomato yield worldwide.. Cultivation of resistant tomato cultivars is the best way to control this disease. Molecular markers linked to resistance genes would be useful for improving tomato breeding programs. This study was conducted to identify resistant (existence Frl gene) and sensitive varieties of tomatoes using RAPD marker.

    Material and Methods

    DNA was extracted using CTAB method from 27 tomato varieties. PCR technique was used to identify F. oxysporum f.sp. radicis-lycopersici. Then RAPD marker UBC 194 was used to amplify resistance gene Frl. Results were confirmed by pathogenicity test.

    Results

    In this study, based on UBC 194 marker it was found that 20 out of 27 tomato varieties and hybrids contained a 590 bp index band (existence of resistance gene Frl). Pathogenicity test showed that the tomato varieties that the resistance gene Frl was found in them had no symptoms while the varieties that did not contain the gene showed disease symptoms with different disease index.

    Conclusion

    Plantation of resistant varieties in the infected areas can control this disease without using fungicides.

    Keywords: Fusarium crown rot, RAPD, Frl gene